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原代肌肉细胞文献资料
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肠道病毒71型诱导沙鼠肌肉细胞凋亡及其机理研究
目的 研究肠道病毒71型(EV71)杀伤沙鼠原代肌肉细胞的作用机理,为EV71的感染机制研究提供依据.方法 采用胰酶/胶原酶消化法分离培养沙鼠原代肌肉细胞,滴加EV71感染细胞,采用CCK-8法检测感染细胞存活率,Hoechst 33258染色法检测感染细胞核变化,AnnexinV/PI双染法检测感染细胞的细胞膜变化,蛋白免疫印迹试验检测感染细胞的PARP-1、Caspase-3、Bcl-2家族蛋白等凋亡因子和NF-κB通路相关蛋白表达量的变化.结果 构建体外沙鼠原代肌肉细胞模型,使其感染EV71后,肌肉细胞出现皱缩、变圆、漂浮等形态学变化,且感染复数(MOI)越大,病变程度越明显,细胞存活率越低(rs=-0.964,P=0.005);细胞内染色质发生浓缩,细胞膜磷脂酰丝氨酸外翻,伴随凋亡小体出现,细胞凋亡与MOI呈正相关(rs=1.000,P＜0.001);凋亡标志蛋白PARP-1与凋亡执行蛋白Caspase-3被剪切激活;抑凋亡蛋白Bcl-xl与Bcl-2的表达量随着MOI的增大而减少;p65蛋白表达水平降低,磷酸化水平升高,NF-κB通路被激活.结论 EV71病毒可以诱导沙鼠原代肌肉细胞发生凋亡.
