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周期性机械应力条件下大鼠软骨细胞的蛋白质组学分析
目的 应用定量蛋白质组学技术筛选周期性机械应力条件下大鼠软骨细胞差异表达蛋白质.方法 将体外培养的大鼠软骨细胞随机分为对照组和周期性机械应力组,分别提取细胞蛋白,并依次进行同位素标记、液相色谱分离、质谱鉴定和生物信息学分析.结果 共鉴定出5468个蛋白,差异性表达蛋白为485个;其中上调168个,下调317个.经生物信息学分析,共有478个蛋白被6079条基因本体论(GO)功能条目注释,230个蛋白参与了241条京都基因与基因组百科全书(KEGG)信号通路.结论 成功构建周期性机械应力条件下大鼠软骨细胞差异蛋白质表达谱,为周期性机械应力促进大鼠软骨细胞增殖和细胞外基质合成的机制研究提供实验基础.
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周期性机械应力通过激活EGFR-ERK1/2信号通路促进大鼠软骨细胞增殖和细胞外基质合成
目的 探讨周期性机械应力促进大鼠软骨细胞增殖和细胞外基质合成的细胞外调节蛋白激酶(ERK) 1/2信号传导机制.方法 取第二代大鼠软骨细胞,随机分为预处理组和对照组.预处理组采用上皮生长因子受体(EGFR)特异性抑制剂(AG1478)阻断EGFR的活化;对照组不给予特殊预处理.两组细胞分别在有、无周期性机械应力条件下培养,1h后采用Western blot检测ERK1/2的表达和磷酸化水平;8h后采用Real-time PCR检测aggrecan和Ⅱ型胶原的基因表达水平.两组细胞分别在有、无周期性机械应力条件下每天培养8h,连续3d后采用CCK-8法检测细胞增殖.结果 当EGFR被抑制以后,周期性机械应力促进的软骨细胞增殖和细胞外基质合成均显著降低,而且ERK1/2的磷酸化水平也下降(P<0.05).结论 周期性机械应力通过激活EGFR-ERK1/2信号通路促进大鼠软骨细胞增殖和细胞外基质合成.