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抗黏病毒文献资料
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人抗黏病毒蛋白-MxA基因克隆及在大肠杆菌中的表达
目的 克隆人抗黏病毒蛋白-MxA基因,构建其原核表达载体并进行表达、纯化、活性鉴定,为深入开展该蛋白功能的研究奠定基础.方法 从IFN-β诱导的A549细胞系中提取总RNA,通过RT-pCR技术扩增出MxA全长cDNA,克隆于pUC119载体,酶切鉴定后并经测序证实序列正确,再克隆于pET-32a(+)载体上构建表达载体pET-32a(+)-MxA,转化大肠杆菌BL21,经IPTG诱导表达并优化诱导条件,通过NTA-Agarose亲和层析和割胶电洗脱法获取纯化MxA蛋白,用SDS-PACE电泳分析表达产物,并通过对病毒VSV的抑制作用鉴定其活性.结果 琼脂糖凝胶电泳结果显示RT-PCR扩增出两条片段,大小同预计片段相符,并经测序证实与公布的MxA基因序列一致;重组载体转化菌经IPTG诱导表达,SDS-PAGE电泳初步鉴定,目的 蛋白约占总菌体蛋白的25%,与预计的分子量91 kd相一致.用NTA-Agarose亲和层析法可获得纯度>95%的目的 蛋白,割胶电洗脱回收法可获得纯度>90%的目的 蛋白.结论 克隆了人抗黏病毒蛋白-MxA基因,克隆基因在大肠杆菌中获得了较高水平的表达,并通过两种方法获得了该蛋白的纯化物.
