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Plasmocin对人多能干细胞支原体感染的消除研究
目的:探究应用Plasmocin消除人多能干细胞支原体感染时的佳浓度和所需天数,检测消除支原体感染后的人多能干细胞(human pluripotent stem cell,hPSC)向神经元的定向分化.方法:应用25.0、12.5、8.5、5.0 μg/mL 4种不同浓度的Plasmocin进行支原体感染的消除,用PCR比较消除结果;对已消除支原体的hPSC进行维持培养以及定向分化.结果:应用4种浓度的Plasmocin均能消除支原体的感染,但其中高浓度组(25.0 μg/mL)出现细胞毒性反应,消除支原体后存活下来细胞较少,而低浓度组(5.0 μg/mL)消除支原体所需给药时间较长,12.5 μg/mL浓度组对细胞生长有不利影响,而8.5 μg/mL浓度组对细胞生长影响较小.hPSC在消除支原体感染后可高效分化至前脑神经元,并且9个月后未检测出支原体.结论:应用8.5 μg/mL的Plasmocin加药1周即可彻底消除hPSC中支原体的感染,并且不会对其定向分化能力造成影响.
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Plasmocin对人胚胎干细胞支原体污染的杀灭效果
目的 人胚胎干细胞(hESCs,human embryonic stem cells)应用广泛,但来源有限.前期检测发现本室培养的H9 hESCs有支原体污染.本研究拟探讨高效支原体杀灭剂plasmocin去除hESCs支原体污染的可能性,及其对hES增殖、分化的影响.方法 常规培养hESCs细胞,用切割法进行传代.分别用低(12.5μg/ml)、中(25 μg/ml)、高(37.5 μg/ml)浓度plasmocin处理hESCs2～3周,用PCR法检测支原体,用结晶紫染色观察hESCs克隆大小,显微镜下观察hESCs分化状况.结果 低、中、高浓度plasmocin处理2周均不能杀灭hESCs的支原体,延长高浓度plasmocin处理时问至3周,亦未能杀灭支原体.实验发现,plasmocin呈剂量依赖性抑制hESCs增殖,且高浓度plasmocin可诱导hESCs分化,而高浓度bFGF(40 ng/ml)则能部分阻断plasmocin抑制增殖和诱导分化的作用.结论 plasmocin未能去除hESCs的支原体污染,可能与支原体产生抗药性及hESCs的克隆生长特性有关.
