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GLGI技术初步验证系统性红斑狼疮患者CD4+、CD8+T细胞基因表达谱
目的 研究GLGI技术鉴定系统性红斑狼疮患者LongSAGE标签的方法.方法 运用GLGI技术,将包括17 bp的SAGE标签及单一碱基和oligo(Dt)锚定引物进行PCR扩增,得到表达基因的3'端序列,并确认表达基因.结果 单一匹配标签12个有9个获得有效扩增,包括原来的17 bp的SAGE标签序列,其长片段测序后有＞85%的碱基与已知基因相符合,表明为该已知基因.20个无匹配标签中未发现有新的基因.结论 GLGI技术能够有效识别基因,LongSAGE-GLGI技术是鉴定SAGE大规模标签库较好的方法.
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利用SAGE标签产生长片段cDNA应用于白念珠菌基因识别
目的鉴定本实验室建立的白念珠菌LongSAGE文库.方法运用利用SAGE标签产生长片段cDNA应用于基因识别(GLGI)技术将白念珠菌的酵母相和菌丝相17 bp的LongSAGE标签扩增至相应的3′ cDNA 端,获得数百个碱基片段,并进行序列分析.结果 20个标签中有15个获得稳定有效的扩增,长度在200～1 000 bp之间,获得的长片段进行序列分析后,有超过95%的碱基与已知基因相同,并且包括原来17 bp的SAGE标签,表明获得的序列为此已知基因.结论研究表明,用SAGE标签作为引物,可有效地识别基因.利用SAGE-GLGI技术可以用来说明更多的白念珠菌的表达基因序列和其它真核生物的基因组.
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高通量GLGI鉴定及分析白念珠菌LongSAGE标签
目的 鉴定并初步分析白念珠菌长片段基因表达序列分析(LongSAGE)标签.方法 建立了一种高通量鉴定LongSAGE标签的技术,应用该技术可批量扩增白念珠LongSAGE标签,使其由17bp扩增至相应的3'cDNA末端,扩增产物TA克隆后进行测序及序列分析(GLGI).结果 30条多重匹配标签中28条得到稳定有效的扩增,40个无匹配标签中30条得到有效扩增,其中21条证实为新表达序列标签(EST),可能代表新的基因,9条和已知基因有一定同源性,可能是已知基因或其同一家族基因.结论 应用高通量GLGI技术成功鉴定了白念珠菌LongSAGE标签,为进一步研究白念珠菌菌相转换机制奠定了基础.
