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卡立泊来德对缺血-再灌注大鼠肺组织钠氢交换蛋白-1表达及炎症损伤的影响
目的：探讨缺血-再灌注(IR)对肺钠氢交换蛋白-1(NHE-1)表达的影响,及卡立泊来德(cariporide)预处理能否通过抑制 NHE-1表达减轻肺组织的炎症损伤。方法20枚离体灌注的大鼠肺随机分为四组：对照组(C 组)、IR 组、NHE-1激活剂 LiCl 预处理组(LiCl 组)和 cariporide 预处理+缺血-再灌注组(CIR 组)。再灌注结束后,免疫组化检测肺组织中 NHE-1蛋白表达,HE 染色观察肺组织病理学改变并行病理评分。结果与 C 组和 CIR 组比较,IR 组和 LiCl 组 NHE-1表达明显增加(P <0.05),CIR 组和 C 组差异无统计学意义。IR 组和 LiCl 组肺组织病理切片均观察到明显炎症损伤,病理评分明显高于 C 组和 CIR 组(P <0.05),CIR 组病理评分和 C 组差异无统计学意义。结论离体的 IR 大鼠肺组织,NHE-1表达增加,选择性 NHE-1抑制剂 cariporide 能减轻 IR 导致的肺组织炎症损伤。
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人NHE-1基因miRNA干扰载体构建、鉴定及干扰效应评价
目的构建人钠氢交换蛋白-1（NHE-1）基因的miRNA特异性干扰表达载体并转染293细胞,筛选其有效性。方法设计4对miRNA oligo,依次通过退火、连接,构建含NHE-1前体miRNA的重组干扰质粒pcDNATM 6.2-GW/NHE-miR和阴性对照质粒pcDNATM 6.2-GW/neg-miR,并转染293细胞,经Re-al-Time PCR评价干扰效应,筛选出干扰效应佳的靶序列。结果测序证实目的片段正确插入载体中,成功构建4个人NHE-1基因miRNA干扰载体;Real-Time PCR证实完成干扰效应评价,并根据NHE-1基因转录调控区及其蛋白分子结构功能区评价结果,得到NHE1-4是佳干扰片段。结论成功构建针对人NHE-1基因的miRNA特异性有效干扰质粒,为后续NHE-1基因腺病毒miRNA表达载体的构建及其在调控APP裂解相关酶类的功能研究奠定了基础。
