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内皮细胞生长添加剂文献资料
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兔外周血内皮祖细胞的培养与鉴定
目的 研究兔外周血内皮祖细胞(EPCs)的分离和定向培养的方法,并对其功能进行鉴定.方法 从兔股静脉插管抽取静脉血20 mL,采用淋巴细胞分离液进行密度梯度离心法分离单个核细胞,接种于人纤连蛋白包被的培养板上,分别予含血管内皮生长因子(VEGF)20 ng/mL或内皮细胞生长添加剂(ECGS)30 μg/mL的M199培养基培养.培养2周后进行免疫荧光染色鉴定内皮祖细胞.结果 每毫升外周血可分离1×106～2×106个单个核细胞,两组均于接种后第2～3天细胞胞体增大,有的呈多边形或梭形;第4天出现条带或栅栏状分布;第7～8天梭形细胞增多;第14天左右出现细胞集落,其特点是中央为圆形细胞,外周是梭形细胞;添加VEGF的培养基组每接种5×105个单个核细胞出现5～10个细胞集落,而添加ECGS者出现8～15个.第4周,添加VEGF的培养基组的细胞开始脱落而死亡,而添加ECGS的细胞仍持续稳定生长,呈铺路石样分布.两组在荧光显微镜下均可见双阳性的EPCs,血管性假性血友病因子(vWF)染色阳性.结论 采用VEGF和ECGS均可体外培养兔外周血内皮祖细胞,且均能使其诱导分化为内皮样细胞,而ECGS较VEGF诱导效果更佳.
