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肾上腺脑白质营养不良蛋白文献资料
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肾上腺脑白质营养不良蛋白慢病毒载体的构建和表达
目的 构建并表达野生型及突变型肾上腺脑白质营养不良蛋白(adrenoleukodyst rophy protein,ALDP)的慢病毒载体,探讨ABCD1基因突变对ALDP结构和功能的影响.方法 选择ABCD1基因的H283R和P534R两个突变,首先采用生物信息学方法,进行突变致病性及突变体结构稳定性预测;再利用分子克隆技术,将ABCD1基因克隆到pLEX-MCS慢病毒载体,构建野生型慢病毒载体:pLEX-ABCD1,定点诱变构建2个突变型重组载体:pLEX-ABCD1-H283R和pLEX-AB-CD1-P534R,并与其他包装载体共转染293T细胞包装病毒.收集病毒并感染宿主细胞,RT-PCR检测慢病毒感染细胞中野生型与突变型ABCD1 mRNA表达,免疫荧光及蛋白质免疫印迹法分析野生型与突变型ALDP亚细胞定位及表达.结果 生物信息学预测显示H283R和P534R为ALD致病性突变;RT-PCR结果显示慢病毒感染细胞中野生型与突变型ABCD1 mRNA均过表达;免疫荧光及蛋白质免疫印迹结果表明,H283R和P534R突变可能导致ALDP突变体表达量下降,但未观察到ALDP定位改变.结论 成功构建ABCD1基因慢病毒表达载体,并评估了H283R和P534R突变对ALDP表达及亚细胞定位的影响,为深入研究ALD发病机制提供了实验依据.
关键词： ABCD1基因 肾上腺脑白质营养不良蛋白 计算生物学 慢病毒属
