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同源引物文献资料
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克隆超基因家族中新基因的一种PCR同源引物
目的:用同源引物克隆RNA低丰度表达的小鼠β-趋化因子受体.方法:将β-趋化因子受体小鼠MIP-1αR,人MCP-1R和大鼠IL-8R跨膜区中高度保守的氨基酸序列中的核苷酸进行相似序列对比后,设计出同源引物,再用RT-PCR扩增出DNA片段,经基因库检索为该超基因家族中的新基因序列后设计特异引物,用Marathon PCR扩增出该新基因.结果:成功克隆出小鼠β-趋化因子受体5(CCR5) cDNA全基因序列,序列全长2 888 bp,开放阅读框1 065个核苷酸,编码355个氨基酸.该序列经序列分析、配体结合试验及国际基因库检索证实为该超基因家族中的一个新基因成员.结论:该克隆策略的引物设计思路较为新颖,能有效捕获超基因家族中的新基因.该克隆方法敏感、高效,对基因家族新基因的克隆具有广泛的意义.
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等位基因特异PCR结合测序检测CYP21A2基因突变的方法
目的 建立一种等位基因特异PCR结合测序检测CYP21A2基因突变的方法.方法 通过对CYP21A2基因和相应假基因CYP21AP序列进行同源性比较,同时设计等位基因特异PCR引物与可扩增CYP21A2和CYP21A2P基因的同源性引物.选择4例先天性肾上腺皮质增生症患者和5名正常对照,比较等位基因特异PCR引物与同源引物测序结果.结果 等位基因特异PCR引物扩增和测序分析结果显示,4例患者均存在突变,分别为IVS2 13A/C＞G、Arg356Trp和Arg149Pro,对照序列正常.同源引物扩增分析只能明确Arg149Pro突变,患者和正常对照均存在IVS2-13A/C＞G和Arg356Trp突变.结论 等位基因特异PCR技术结合测序可简便可靠地进行CYP21A2基因突变检测,具有临床应用推广价值.
