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核糖体失活作用文献资料
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蓖麻毒素A链蛋白的表达、活性及其对人肺腺癌细胞SPC的毒性作用
目的:研究构建重组单链免疫毒素,对人体肿瘤进行导向治疗.方法:采用PCR方法从克隆化载体中拉出蓖麻毒素A链(ricin A)基因,装入经过改建的pTSA-18F表达载体,进行目的基因DNA序列分析后导人E.coli BL21(DE3)中进行表达,表达产物进行SDS-PAGE和Western blot检查,表达产物的生物活性通过RNA N-糖苷酶活性检查、无细胞体系中对蛋白质生物合成的抑制以及对肿瘤细胞的毒性作用来分析.结果:SDS-PAGE检查表明,转化子E.coli BL21(DE3)(pTSRA)中出现1条Mr约30×103大小、较空载体对照E.coli BL21(DE3)(pTS)明显浓黑的条带;Western blot检查表明,转化子E.coli BL21(DE3)(pTSRA)中有杂交条带出现,而E.coli BL21(DE3)(pTS)中没有;表达蓖麻毒素A链蛋白能够特异地作用于大鼠肝28S核糖体RNA,使其产生约450 nt大小的核酸片段;对无细胞体系中蛋白质生物合成的IC50为3.7×10-9mol/L,略高于天然蓖麻毒蛋白;具有与天然蓖麻毒蛋白相近的肿瘤细胞毒性.结论:蓖麻毒素A链基因在转化子E.coli BL21(DE3)(pTSRA)中获得表达,表达产物具有与天然蓖麻毒蛋白相近的RNA N-糖苷酶活性,在无细胞体系中对蛋白质生物合成具有抑制作用,对肿瘤细胞SPC具有毒性作用.
