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酪氨酸激酶4文献资料
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日本血吸虫酪氨酸激酶TK4保守区编码基因的克隆和分析
目的 克隆和表达日本血吸虫大陆株酪氨酸激酶(TK4)保守区编码基因,并分析其在日本血吸虫雌、雄虫间的差异表达.方法 以日本血吸虫大陆株成虫总RNA为模板,经逆转录PCR (RT-PCR)扩增目的基因片段.纯化PCR产物与原核表达载体pET28a质粒连接构建重组质粒pET28a-SjTK4,在异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导下表达重组蛋白rSjTK4并进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、蛋白质印迹(Western blotting)和生物信息学分析.随后,分别提取日本血吸虫雄虫、雌虫及雌雄混合虫体总RNA后,将其逆转录为cDNA,并进行实时荧光定量PCR,确定TK4基因在雌、雄虫虫体的表达水平. 结果 RT-PCR扩增出一条582 bp的基因片段,序列分析表明该片段与SmTK4保守区基因序列同源性为91％,推导的氨基酸序列同源性为98％.SDS-PAGE分析显示,rSjTK4重组蛋白的相对分子质量(Mr)约为26 000(含组氨酸标签).生物信息学分析显示,该蛋白具有多个酶活性位点.雄虫和雌虫中TK4的cDNA相对拷贝数分别为0.61±0.29和0.03±0.02,雄虫TK4的mRNA表达量为雌虫的18倍.结论 日本血吸虫TK4保守区编码基因克隆和表达获得成功,该基因的mRNA在日本血吸虫雄虫的表达量显著高于雌虫.
