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C端片段文献资料
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淀粉样前体类蛋白2-C端不同片段对S100A9蛋白表达的影响
[目的]探讨淀粉样类前体蛋白2-C端不同片段(APLP2-CTFs)对S100A9蛋白表达的影响.[方法]将pEGFP-APLP2-C57,C50,C31转染BV2细胞,采用蛋白印迹方法和RT-PCR方法检测S100A9蛋白表达和mRNA水平.[结果]转染pEGFP-APLP2-C57,C50,C31的细胞中,S100A9蛋白表达和mRNA水平均增高,与空载体转染组比较差异具有统计学意义(P＜0.05).[结论]转染APLP2-CTFs使S100A9蛋白表达和mRNA水平均增高.
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人MASP1和MASP2 C端片段的原核表达
目的 在大肠杆菌中表达人甘露聚糖结合凝集素(MBL)相关丝氨酸蛋白酶1、2(MASP1、MASP 2)C端片段.方法 采用PCR技术从分别含人MASP1、MASP 2 cDNA的质粒pGEM-MASP1、pGEM-MASP2中扩增MASP1、MASP2 C端基因片段,将其插入原核表达载体pET17b,转化感受态大肠杆菌BL21(DE3),诱导表达MASP1、MASP2 C端蛋白,通过Ni2+-NTA亲和层析柱纯化目的 蛋白,以SDS-PAGE、Western blot和ELISA进行鉴定.结果 分别从pGEM-MASP1和pGEM-MASP2中扩增到约1 300 bp的基因片段,构建成重组表达载体,经酶切出现约3 300 bp和1 300 bp片段,测序结果与预期的完全一致.纯化蛋白经SDS-PAGE可见Mr40 000蛋白带,该蛋白可与抗His抗体反应.结论 获得了重组人MASP1和MASP2 C端片段蛋白及其表达菌株,为MASP分子的进一步研究提供了条件.
关键词： 甘露聚糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶1、2 C端片段 原核表达
