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自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤对顺铂诱导肺癌A549细胞凋亡的影响
目的 探讨自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)对顺铂(DDP)诱导肺癌A549细胞凋亡的影响.方法 用MTT法检测药物适浓度和作用时间,以及不同组肺癌A549细胞增殖率；通过MDC染色法将细胞染色检测自噬空泡的变化；Hoechst33342染色检测细胞形态变化；流式细胞术检测细胞凋亡率.结果 DDP作用于A549细胞后细胞增殖率明显下降,并在细胞内可见大量自噬空泡及细胞核染色质凝聚.3-MA和DDP联合作用组细胞增殖率较单独应用DDP组明显下降,细胞自噬水平降低,细胞凋亡率明显增加.结论 DDP能诱导肺癌A549细胞发生自噬和凋亡,而抑制自噬可以促进DDP诱导的细胞凋亡.
关键词： 3-甲基腺嘌呤(3-MA) 顺铂(DDP) 自噬 细胞凋亡 -
比较热休克蛋白A5和3-甲基腺嘌呤和介导小鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用
目的:比较研究热休克蛋白A5(HSPA5)和3-甲基腺嘌呤(3-MA)介导小鼠脑缺血再灌注(I/R)损伤性自噬的保护作用.方法:成年雄性BALB/c小鼠30只,分为6组:sham组、缺血再灌注组(I/R组)、vehicle+ I/R组、3-甲基腺嘌呤(3-MA)+ I/R组、scramble siRNA+ I/R组和HSPA5 siRNA+ I/R组,每组5只.采用大脑中动脉阻塞(MCAO)60 min后再灌注24h制作小鼠I/R模型.Vehicle+ I/R组和3-MA+ I/R将5μl 0.9％ NaCl或3-MA (30 mg/ml)在MCAO前30 min侧脑室注射;scramble siRNA+ I/R group组和HSPA5 siRNA+ I/R组将5μlscramble siRNA或HSPA5 siRNA(2μg/μl)在MCAO前24 h侧脑室注射.通过小鼠I/R后神经功能评分确定运动功能障碍程度.小鼠神经细胞内自噬体形成用透射电子显微镜测定,再灌注24h缺血大脑皮层(LC3)-Ⅱ/LC3-Ⅰ表达用Western Blot方法检测.小鼠I/R后缺血大脑神经细胞损伤用Nissl染色进行观察.结果:HSPA5和3-MA可以影响I/R小鼠行为学改变并使脑缺血性损伤和神经症状加重(P＜0.05).透射电子显微镜检测可见,sham组小鼠大脑皮层神经细胞形态正常,I/R组小鼠缺血大脑皮层神经元胞质中细胞器减少,形成自噬体.与sham组小鼠比较,I/R组小鼠缺血大脑皮层LC3-Ⅱ蛋白表达水平显著增高(P ＜0.05);3-MA+ I/R或HSPA5 siRNA+I/R小鼠缺血大脑皮层LC3-Ⅱ蛋白表达水平明显低于I/R小鼠(P＜0.05).结论:HSPA5和3-MA在介导小鼠脑缺血再灌注损伤导致的自噬可发挥相同的保护作用,并且促进神经细胞凋亡.
