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CH3 knob-into-hole Minibody 双特异抗体文献资料
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抗HBsAg和抗RBC双特异minibody载体的构建及表达
目的：用抗HBsAg和抗RBC单链抗体构建双特异minibody抗体模型。方法：将人IgG1 CH3经点突变方式，在CH3界面由大分子氨基酸代替小分子氨基酸形成“knob”(T366W)(杵状结构)，另一个CH3分子由3个小分子氨基酸代替3个大分子氨基酸形成“hole”(T366S：L368A：Y407V)(臼状结构)，并在此基础上在适当位置引入半胱氨酸残基形成二硫键(S354C：T366W/Y349C：T366S：L368A：Y407V)。然后将“knob”和“hole”分别接连于抗HBsAg和抗RBC单链抗体基因3'端，并将两基因组装于同一表达载体中，在大肠杆菌中分泌表达。结果：依CH3界面不同共构建3种不同的表达载体，分别带有①野生型CH3，②杵臼结构(T366W/T366S：L368A：Y407V)突变型CH3，③杵臼结构加二硫键(S354C：T366W/Y349C：T366S：L368A：Y407V)突变型CH3。大肠杆菌分泌表达后，ELISA法检测抗HBsAg和抗RBC活性，3种表达上清均有相同的抗HBsAg和抗RBC活性；两种带有突变型CH3的minibody用血球凝集法可检测到抗HBsAg和抗RBC双特异活性。结论：CH3界面经适当改造可促进异源二聚体形成，并在大肠杆菌获得功能性表达，得到双特异minibody。
