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超声波对体外培养猪前脂肪细胞增殖分化的抑制效应
背景:软组织充填是临床的难题,已经证实超声波作用后的成熟脂肪细胞不能用于细胞移植,脂肪组织工程有希望解决这一问题.目的:观察超声波对前脂肪细胞体外培养与增殖的影响,验证超声辅助吸脂术后前脂肪细胞作为脂肪组织工程种子细胞的可行性.计:对照观察实验.单位:武汉大学人民医院整形外科.材料:实验于2003-07/2004-09在武汉大学医学院完成.3月龄本地杂交猪1头(武汉大学医字院实验动物中心提供)氯胺酮麻醉后,于背部两侧各标记10 cm×20 cm的矩形取材区,右侧为实验组,左侧为对照组.方法:实验组用体外超声波预处理8 min,能量3 W/cm2.无菌条件下掀开皮肤层,分别切取两侧皮下脂肪组织各100 g,放入预先已备好的盛有冷D-hanks液容器中待用.将经过超声波作用后的实验组脂肪组织猪前脂肪细胞进行分离和体外培养,并每隔2 d测定其细胞数量及脂质含量,结果以3孔的细胞均数表示.对照组除了不进行超声波预处理处,前脂肪细胞的培养方法同实验组.绘制两组生长曲线.采用油红O染色提取法测定细胞内的脂肪含量,于HITACHI G2000型分光光度计510 nm波长处测定吸光度.主要观察指标:①猪前脂肪细胞培养的形态学观察.②实验组及对照组的生长曲线.③实验组与对照组脂质含量的变化.结果:①对照组6～24 h细胞完成贴附,实验组一两天才基本贴壁,且未贴壁细胞较多;4 d后对照组细胞内见脂肪颗粒积聚,实验组6 d后才见到;12 d时对照组基本分化成单脂滴或多脂滴的细胞,并有少量漂浮的成熟脂肪细胞,实验组产生脂滴的细胞较少.②在细胞数量相同的情况下,实验组细胞倍增时间约为72 h,对照组为36 h,培养9 d后实验组与对照组的细胞总数分别为13×104个/孔、18×104个/孔,实验组细胞增殖速率缓慢.③实验组脂质出现时间约为培养后6 d,对照组为4 d,吸光度峰值分别为0.32、0.68.结论:超声波对前脂肪细胞的增殖分化有明显的抑制作用,经超声波处理的前脂肪细胞不宜用作种子细胞.
