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真皮模版文献资料
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真皮多能干细胞复合血浆构建真皮再生模版及移植观察
背景:要实现组织工程皮肤生物学功能重建,应从重建功能正常的真皮入手,使之成为汗腺、血管、神经和脂肪再生的场所.目的:以真皮多能干细胞为种子细胞构建真皮再生模版,观察其移植后的成活状态.设计、时间及地点:单因素设计,重复观察,于2006-01/06在中山大学眼科中心国家重点实验室和中山大学动物中心进行.材料:6周龄BALB/c裸鼠10只,由中山大学动物中心提供.人皮肤多能干细胞来源于接受瘢痕整形手术患者的正常皮肤,由汕头大学医学院附属第二医院烧伤整形科提供.人O型血浆为大连制药有限公司产品.方法:取10 mL人O型血浆,与生理盐水、氨甲环酸混匀后,添加1×105个经5-Brdu标记的人皮肤多能干细胞克隆,振荡致细胞团均匀分布在血浆中,再滴加氯化钙,放置37℃培养箱30 min后成凝胶状,然后加入含胎牛血清、B27的DMEM/F12培养液,培养四五天细胞融合成片,吸干凝胶表面水分,使之成膜状,即为真皮模版.裸鼠麻醉后,背部制作全层皮肤缺损创面,然后植入真皮模版,覆盖创面.主要观察指标:真皮模版移植后观察血管化程度,创面上皮化后免疫组织化学检测模版中5-Brdu标记干细胞的成活状态.结果:人皮肤多能干细胞在血浆中增殖良好,真皮模版为白色生物膜,厚(500±254)μm,真皮模版中部分细胞仍表达nestin.真皮模版植入后,第3天模版下有少量的血管生成,第9天大量细胞迁入模版中.创面上皮化后第1,3周,皮肤组织的表皮和真皮中均可见大量5-BrdU阳性细胞分布.结论:人皮肤多能干细胞接种于血浆中构建的真皮模版移植后,能较快血管化,且真皮模版干细胞在受体组织中能成活下来.
