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新生牛皮胶原蛋白海绵的制备及其体外细胞相容性
背景:现已证实,人肌腱、牛肌腱、鼠尾、猪皮、新生牛跟腱制备的胶原蛋白海绵有良好的细胞相容性.目的:采用新生牛皮提取胶原蛋白、制备生物医用胶原蛋白海绵,观察其与羔羊肾成纤维细胞的相容性.设计、时间及地点:对比观察实验,于2006-05/2007-02在西北民族大学生命科学与工程学院生物工程与技术国家民委重点实验室完成.材料:出生24 h内宰杀的新生尕里巴牛犊皮,岷县黑裘皮羔羊肾原代成纤维细胞.方法:取新生牛犊皮,经脱毛、胃蛋白酶+冰醋酸联合处理、盐析、透析、冻干后制备胶原蛋白海绵.将海绵与羔羊肾F3代成纤维细胞混悬液共培养,分别设胶原海绵材料组、阴性对照组(生理盐水)、阳性对照组(橡胶塞浸提液).主要观察指标:应用倒置相差显微镜及JVC数码摄像系统观察、拍摄与记录细胞形态、生长情况.培养20,35 d,对共培养物进行AO染色,观察细胞在胶原海绵中的增殖情况.培养65 d后制石蜡切片,行苏术精一伊红染色,观察细胞在胶原海绵中的生长情况.结果:阳性对照组细胞培养24 h细胞圆缩,不贴壁,3 d后伞部死亡.胶原海绵材料组与阴性对照组细胞形态均正常,细胞贴壁生长良好.随着培养时间的延长,海绵孔隙逐渐变小,细胞数量增加,形态变小,海绵外观从柔软、混浊变得挺拔、透明.AO染色显示培养20,35 d的胶原海绵-羔羊肾成纤维细胞共培养物中有大鼍细胞存在,并且在胶原蛋白空隙中有大量细胞成团簇状生长.苏木精-伊红染色显示有大量蓝色细胞核和新生的红色胶原纤维.结论:制备的新生牛皮胶原蛋白海绵对岷县黑裘皮羔羊肾成纤维细胞有良好的相容性.
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新生牛皮胶原蛋白海绵的制备及其体外细胞相容性
目的:采用新生牛皮提取胶原蛋白、制备生物医用胶原蛋白海绵,观察其生物学活性与细胞相容性.方法:实验于2006-05/2007-02在西北民族大学生命科学与工程学院生物工程与技术国家民委重点实验室完成.实验方法:①取出生24 h内宰杀的新生尕里巴牛犊皮制备胶原蛋白海绵.②将新生牛皮胶原蛋白海绵与黑裘皮羔羊肾F3代成纤维细胞混悬液共培养,分别设胶原海绵材料组、阴性对照组(生理盐水)、阳性对照组(橡胶塞浸提液).实验评估:①应用倒置相差显微镜观察细胞形态.②培养20,35 d对细胞与胶原蛋白海绵共培养物进行AO染色观察细胞在胶原海绵中的增殖情况.③培养65 d后制石蜡切片,行苏木精-伊红染色观察细胞在胶原海绵中的生长情况.结果:①细胞形态观察结果:阳性对照组细胞培养24 h细胞圆缩,不贴壁,3 d后全部死亡.胶原海绵材料组与阴性对照组细胞形态均正常,细胞贴壁生长良好.随着培养时间的延长,海绵孔隙逐渐变小,细胞数量增加,形态变小,海绵外观从柔软、混浊变得挺拔、透明.②细胞在胶原海绵中的增殖情况:吖啶橙-AO染色显示培养20,35 d胶原海绵-羔羊肾成纤维细胞共培养物中有大量细胞存在,并且在胶原蛋白空隙中有大量细胞成团簇状生长.③细胞在胶原海绵中的生长情况:苏木精-伊红染色显示有大量蓝色细胞核和新生的红色胶原纤维.结论:制备的新生牛皮胶原蛋白海绵对岷县黑裘皮羔羊肾成纤维细胞有良好的生物相容性,无细胞毒性.
