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对虾白斑综合症病毒IE1基因表达与鉴定
目的 探讨对虾白斑综合症病毒极早期基因IE1原核表达载体的构建与表达.方法 将IE1编码序列克隆入pGEX-4T-2原核表达载体,并转染大肠埃希菌BL21,异丙基-β-D硫代半乳糖苷(IPTG)诱导谷胱甘肽硫转移酶(GST-IEI)融合蛋白表达,亲和层析法纯化,并用聚丙烯酰胺变性凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白印迹(western blot)对融合蛋白进行鉴定.结果 克隆到IE1基因序列长675bp,编码224个氨基酸,理论分子量为25 kDa,等电点为4.87,所构建的重组体经PCR、双酶切及测序鉴定与目标基因相符,SDS-PAGE结果表明,目的基因在大肠埃希氏菌BL21中表达成功.结论 克隆构建了对虾白斑综合症病毒极早期基因IE1,并在原核细胞中获得表达.
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白斑综合症病毒极早期蛋白IE3的原核表达、纯化和鉴定
目的:构建对虾白斑综合症的极早期基因IE3的原核表达载体,制备纯化重组蛋白IE3.方法:以感染白斑综合症病毒的对虾心脏组织为模板,PCR法扩增极早期基因IE3基因的编码序列,并将其克隆到原核表达载体pGEX-4T-2中,构建重组质粒pGEX-4T-2-IE3.质粒经双酶切鉴定及序列测定后,转化E.coli BL21,IPTG诱导表达GST-IE3融合蛋白,并利用SDS-PAGE和Western blot对表达的蛋白进行鉴定.结果:PCR产物大小及其双酶切鉴定均证明所克隆的基因是IE3,DNA序列测定进一步证实与GenBank报道的序列完全一致.成功构建了重组原核表达载体pGEX-4T-2-IE3,并在大肠杆菌中高效表达出相对分子质量(Mr)约33000的具有可溶性的融合蛋白,且Western blot证实确为目的蛋白.结论:成功构建了重组表达载体pGEX-4T-2-IE3,并表达出重组蛋白GST-IE3.为进一步研究对虾白斑综合症的防治提供了平台.
