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TaqMan探针荧光定量RT-PCR文献资料
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黄病毒属TaqMan探针荧光定量RT-PCR检测方法建立
目的 建立用于检测黄病毒属的TaqMan探针荧光定量RT-PCR方法.方法 从GenBank中检索黄病毒属代表株的全基因序列,通过DNAstar进行序列比对和blast进行保守序列搜索和分析,用Beacon Designer 7.0软件进行引物和TaqMan探针设计,以乙脑毒株MB090509 RNA为模板,优化反应条件并应用于现场蚊虫标本检测.结果 确定黄病毒属TaqMan探针荧光定量RT-PCR反应条件为:45℃15 min,95℃10 min,95℃10 s→54℃45s,40次循环,引物和探针终浓度为200 nmol/L.灵敏度为常规RT-PCR方法100倍,检出限2.9×10-3噬斑形成单位(PFU)/mL,与甲病毒属、东南亚十二节段RNA病毒属、布尼亚病毒属均无交叉反应.从161份现场蚊虫标本中检测出11份阳性标本,经病毒分离、测序均被证实为乙脑病毒.结论 本研究建立的黄病毒属TaqMan探针荧光定量RT-PCR方法具有广泛应用价值.
关键词： 黄病毒属 TaqMan探针荧光定量RT-PCR
