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稳定表达载体文献资料
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STAT3-shRNA-pGenesil稳定表达载体的构建与应用
目的:构建siRNA的DNA稳定表达载体,为研究RNAi在哺乳动物内持续、稳定抑制靶基因表达奠定基础.方法:合成含靶向STAT3基因的siRNA转录模板的发夹结构,将载体质粒pGenesil-1用BamHⅠ与HindⅢ进行双酶切后,T4DNA连接酶连接成重组质粒,转染到肝癌SMMC-7721细胞中进行稳定筛选、表达,检测稳定筛选前后STAT3基因的表达变化.结果:重组质粒在大肠杆菌菌株JM109内扩增.提纯、纯化后经PCR及测序鉴定证明STAT3-siRNA转录模板完整、正确地插入到pGenesil-1质粒中,建立了稳定抑制STAT3基因的SMMC-7721细胞株,并在mRNA水平抑制了肝癌SMMC-7721细胞STAT3基因表达.结论:成功构建了STAT3-shRNA-pGenesil稳定表达载体,能在哺乳动物细胞中表达,并初步应用于靶基因的抑制.
