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PKCα、PKCβⅠ与早期糖尿病肾病关系
糖尿病肾病是糖尿病严重的并发症,糖尿病导致的肾脏损害几乎可以累积肾脏所有结构,从肾小球、肾小管、肾脏间质和血管,糖尿病患者一旦出现肾脏损害其进展程度远远快于非糖尿病患者[1].糖代谢异常、血流动力学的改变、多种细胞因子、氧化应激、遗传因素都参与糖尿病肾病的发展.PKCα、PKCβⅠ是蛋白激酶C(PKC)家族中经典型PKC(nPKC)的亚型,参与细胞增殖、分化、凋亡、血管生成等多种信号传导过程.正常情况下在肾小球内皮细胞、上皮细胞、系膜细胞表达[2],其PKCβⅠ在近曲小管中也有表达[3],目前研究表明PKCα参与糖尿病肾病蛋白尿形成;PKCβⅠ促进糖尿病肾病肾脏体积增大的发生.钙离子、二酰甘油(DAG)、佛波酯等可作为第二信使,在PKCα、PKCβⅠ完成一系列磷酸化后促进其终活化,但这些第二信使在正常肾组织中含量较低,并很快代谢失活.早期糖尿病肾病发生的关键为糖代谢异常及血流动力学改变,糖代谢异常可通过一系列途径促进DAG合成,血流动力学改变可以牵拉肾小球系膜细胞促进PKC表达,笔者就近几年PKCα、PKCβⅠ与糖尿病肾病进展做一综述.
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高浓度葡萄糖诱导大鼠肾小球系膜细胞VEGF的表达上调依赖于PKCβⅠ和RhoA的活化
目的:研究高浓度葡萄糖是否通过蛋白激酶C(PKC)β Ⅰ和RhoA信号通路介导大鼠肾小球系膜细胞血管内皮生长因子(VEGF)表达上调.方法:体外培养SD大鼠肾小球系膜细胞,给予葡萄糖和各种抑制剂处理细胞,提取细胞蛋白,采用Western免疫印迹检测PKCβⅠ及RhoA蛋白的表达量变化,同时提取RNA,采用实时定量PCR观察VEGF mRNA浓度变化.结果:高浓度葡萄糖(30 mmol/L)诱导肾小球系膜细胞VEGF mRNA表达增加,而甘露醇对照组VEGF mRNA表达水平未见明显改变(P＞0.05).高浓度葡萄糖刺激系膜细胞RhoA和PKCβⅠ发生活化,RhoA GTP蛋白和胞膜PKCβⅠ蛋白均呈时间依赖性增加.使用Rho激酶特异性抑制剂(HA-1077)预处理细胞后,VEGF mRNA表达量与高糖组相比明显下调(P＜0.05).进一步使用广谱PKC抑制剂(PMA)、传统PKC抑制剂(G(O)6976)以及PKCβ特异性抑制剂(LY333531)预处理细胞后,VEGF mRNA和RhoA-GTP蛋白表达量与高糖组相比均受到抑制(P＜0.05).结论:高浓度葡萄糖可能通过间接活化PKCβ Ⅰ来激活RhoA信号通路,从而上调系膜细胞VEGF的表达,该信号通路在糖尿病肾病的病理过程中发挥着重要作用.
