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miRNA-20a在膀胱癌中的表达及其机制研究
目的:探讨miRNA-20a在膀胱癌组织中的表达及其机制.方法:收集2014年1月至2015年1月昆明医科大学第二附属医院96例患者的组织标本,运用实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)方法检测miRNA-20a在膀胱癌组织和癌旁组织中的表达;生物信息学方法预测miRNA-20a的靶基因并采用双荧光素酶报告基因实验进行验证;qRT-PCR、Western blot以及细胞免疫荧光分别检测人膀胱癌细胞系T24和J82细胞转染miRNA-20a模拟物或阴性对照后对靶基因mRNA和蛋白表达的影响;CCK-8、Transwell侵袭小室和划痕实验检测过表达miRNA-20a后T24细胞体外增殖、迁移和侵袭能力的改变.结果:miRNA-20a在膀胱癌组织中高表达,且与肿瘤的病理分级、临床分期、转移以及复发密切相关(P<0.001);双荧光素酶报告基因实验证实miRNA-20a与人源性长寿保障基因2(Homo sapiens longevity assurance homologue 2,LASS2)的3'-UTR直接靶向结合;转染miRNA-20a模拟物可显著下调膀胱癌细胞中LASS2 mRNA和蛋白的表达(P<0.01),增强膀胱癌细胞的增殖、侵袭和迁移能力(P<0.01).结论:miRNA-20a在膀胱癌组织中高表达,且miRNA-20a可通过靶向抑制LASS2促进膀胱癌细胞的增殖、侵袭和迁移,与膀胱癌的发生发展相关.
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实时荧光定量PCR检测miR-17和miR-20a在胃癌细胞中的表达
目的 研究miRNA-17和miRNA-20a在胃癌细胞、正常胃黏膜上皮永生化细胞中的表达,探讨miRNA-17和miRNA-20a对胃癌发生发展的调控作用.方法 培养两种胃癌细胞株及正常胃黏膜上皮细胞,提取细胞中的总的Small RNA,采用Real-time PCR法检测miRNA-17和miRNA-20a在胃癌细胞的表达,分析miRNA-17和miRNA-20a的表达与细胞分化程度、细胞增殖的关系.结果 Real-timePCR法证实miRNA-17和miRNA-20a在胃癌细胞中均表达下调,差异具有统计学意义.miRNA-17和miRNA-20a的低表达与细胞分化程度有关.结论 miRNA-17和miRNA-20a在胃癌细胞中的表达明显下调,可能发挥抑癌基因的作用参与胃癌的发生、发展.
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血浆miRNA-20a和miRNA-210对肺癌的诊断价值评价
目的:探讨血浆miRNA-20a和miRNA-210表达水平用于肺癌诊断的可行性及临床价值.方法:采用荧光定量PCR法检测58例肺癌患者和46例良性肺疾病患者血浆miRNA-20a和miRNA-210的表达.同时分析血浆miRNA-20a和miRNA-210表达水平与患者临床病理特征的相关性.构建受试者工作特征(ROC)曲线,评估这两类miR-NA诊断肺癌的效能.根据ROC曲线确定这两类血浆miRNAs诊断肺癌的折点(临界值),计算敏感性、特异性等,并与经典的肿瘤标志物癌胚抗原、细胞角蛋白19(Cyfra21-1)的测定结果进行比较.结果:肺癌患者血浆中miRNA-20a和miRNA-210的表达水平均明显高于良性肺疾病对照组(P<0.01).血浆miRNA-20a的表达与患者的临床病理特征无相关性,而血浆miRNA-210表达水平与肺癌的组织学类型、分化程度及临床分期显著相关(P=0.008、P=0.041和P=0.016).血浆miRNA-20a和miRNA-210的ROC曲线下面积(AUC)分别为0.883(95%可信区间0.821~0.946)和0.824(95%可信区间0.745~0.904),高于癌胚抗原和Cyfra211的0.656(95%可信区间0.551~0.761)和0.754(95%可信区间0.658~0.847).血浆miRNA-20a和miRNA-210诊断肺癌的敏感性(77.6%和75.9%)和准确性(81.7%和77.9%)高于癌胚抗原(44.8%和62.5%)和Cyfra211(56.9%和72.1%),这两种miRANs联合检测能进一步提高肺癌诊断的敏感性,但特异性略有下降.此外,两种miRANs联合癌胚抗原或Cyfra21-1能进一步提高对肺癌的诊断效能.结论:血浆miRNA-20a和miRNA-210有可能作为诊断肺癌的生物标志物.
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miRNA-20a-BCL-2信号通路介导雷公藤红素、平阳霉素对舌鳞癌细胞增殖与侵袭的实验研究
目的 探讨miRNA-20a-BCL-2信号通路介导雷公藤红素、平阳霉素对舌鳞癌细胞(Tca8113)增殖与侵袭.方法 Tca8113细胞液于DMEM培养液中培养,作为对照组;雷公藤红素组、平阳霉素组、联合组(雷公藤红素+平阳霉素)的培养方法为10％胎牛血清DMEM培养液分别含有20μg/mL的雷公藤红素、20μmol/mL的平阳霉素以及20μg/mL雷公藤红素+20μmol/mL平阳霉素.以上各组每孔设6个平行样,培养48h,培养结束后,检测Tca8113细胞活力、凋亡、侵袭情况,实时荧光逆转录法测定miRNA-20a、BCL-2 mRNA水平,酶联免疫吸附法测定MMP-9、cyc D1、VEGF蛋白水平.结果 与对照组比较,雷公藤红素组、平阳霉素组、联合组增加Tca8113细胞抑制率[(72.56±0.98)％、(59.43±0.44)％、(92.44±0.16)％比(0.00±0.00)％,P<0.05],Tca8113细胞凋亡率[(42.32±9.43)％、(43.09±8.21)％、(60.54±9.88)％比(29.34±8.32)％,P<0.05],降低Tca8113 miRNA-20a RNA水平[(1.53±0.17)、(1.52±0.20)、(0.53±0.10)比(1.97±0.25),P<0.05],Tca8113 BCL-2 RNA水平[(4.13±0.36)、(4.16±0.39)、(2.32±0.29)比(5.16±0.21),P<0.05)],Tca8113穿膜数[(434±25)个、(458±54)个、(223±33)个比(757±19)个,P<0.05],Tca8113 MMP-9水平[(465.32±15.32)μmol/L、(469.98±43.76)μmol/L、(196.14±19.23)μmol/L比(567.98±23.76)μmol/L,P<0.05],Tca8113 cyc D1水平[(345.87±13.98)μmol/L、(352.87±16.98)μmol/L、(172.87±9.54)μmol/L比(578.00±15.09)μmol/L,P<0.05],Tca8113 VEGF水平[(630.87±14.87)μmol/L、(625.87±15.76)μmol/L、(245.76±32.76)μmol/L比(916.91±28.97)μmol/L,P<0.05].结论 雷公藤红素联合平阳霉素能抑制miRNA-20a-BCL-2信号通路及下游细胞因子的表达,进而抑制Tca8113增殖、侵袭.
