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人源性神经营养素-6对大鼠面运动神经元逆行溃变的保护作用
目的:探讨人源性神经营养素-6对受损伤神经元的保护作用,为全面了解人源性NT-6的神经生物学特性以及为临床上退行性神经病变的治疗提供实验依据.方法:将健康成年SD大鼠随机分为两组,即不做任何处理的正常对照组和切断一侧面神经后引起面运动神经元逆行溃变的实验组;实验组又根据面肌内注射物的不同分为空白对照组、人源性NT-6实验组和生理盐水对照组.动物饲养两周后,取脑干切片,行尼氏染色和胆碱乙酰基转移酶免疫组化染色,观察人源性NT-6对逆行溃变的面运动神经元的保护作用.结果:与空白对照组和生理盐水对照组相比,NT-6实验组面神经核尼氏染色的强度值和面神经核内ChAT阳性神经元数目显著增加.结论:人源性NT-6对由于轴突损伤引起逆行溃变的神经元具有保护作用.
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人源性神经营养素-6成熟肽基因融合表达载体的构建及表达产物的纯化
为了得到人源性神经营养素-6(Neurotrophin-6, NT-6)成熟肽片段,本研究以经测序鉴定的人源性NT-6 cDNA为模板,通过聚合酶链式反应(Polymerase chain reaction,PCR)扩增得到NT-6蛋白成熟肽编码区基因片段;将该基因克隆到融合表达载体pGEX1-λT,构建重组原核融合表达质粒pGEX-NT-6;在异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(Isopropyl β-D-thiogalactoside, IPTG)诱导的条件下,观察融合蛋白在大肠杆菌JM109中的表达情况;利用蛋白回收试剂盒对表达产物进行纯化.结果表明经PCR扩增后,得到一分子量为460 bp左右的片段 ;含有该片段的重组质粒经电泳及双酶切鉴定表明,所得到的重组质粒即为含有目的片段的pGEX1-NT-6;与带有pGEX1-λT质粒的细菌相对照,pGEX1-NT-6质粒转化的大肠杆菌JM109,在IPTG诱导下表达了特异性的融合蛋白,该蛋白分子量为41 KD.获得的融合蛋白经凝血酶酶切后,得到了分子量大约为15 KD的 NT-6成熟肽.本研究成功构建了人源性NT-6成熟肽编码区基因融合表达载体,并纯化了其表达产物,为研究人源性NT-6的生物学功能奠定了基础.
