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Rn-p65-siRNA文献资料
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RNAi靶向抑制p65基因对大鼠骨髓间充质干细胞向神经元分化的影响
目的:探讨RNAi靶向抑制p65基因对骨髓间充质干细胞(MSCs)向神经元分化中的影响.方法:采用RNAi干扰技术,Rn-p65-siRNA转染体外培养的大鼠MSCs,用盐酸法舒地尔诱导MSCs向神经元分化,并以未转染组及Cy3标记的negative control siRNA为对照组.在倒置荧光显微镜下观察经negative control siRNA转染24h、48h及72 h后MSCs的荧光表达变化;采用MTT比色法检测转染前、转染24h、48h及72 h后MSCs的存活率;RT-PCR检测p65 mRNA的表达;Western blot法检测3组MSCs中p65蛋白的表达;细胞免疫组化法检测p65蛋白、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、神经元微管结合蛋白(MAP-2)和胶质细胞原纤维酸性蛋白(GFAP)的表达.结果:Negative control siRNA转染72 h,MSCs荧光表达强,转染率可达83.3％±3.8％;Rn-p65-siRNA转染组MSCs的p65 mRNA转录下降,p65蛋白表达减少;Rn-p65-siRNA转染组的MSCs存活率也显著减少,显著高于对照组(P＜0.05).转染72 h后,诱导转染组MSCs向神经元分化的诱导效果佳,可高效表达NSE、MAP-2等,而不表达胶质纤维酸性蛋白(GFAP),与对照组比较有统计学差异(P＜0.05).结论:靶向抑制p65基因表达可促进骨髓间充质干细胞(MSCs)向神经元分化.
