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多重甲基化特异性PCR文献资料
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10个肺癌相关基因多重甲基化特异性PCR检测方法的建立
目的 建立10个肺癌相关基因的多重甲基化特异性聚合酶链反应(PCR)检测方法并运用于临床标本的检测.方法 选取19例肺癌患者病灶组织标本,患者中男性16例,女性3例;平均年龄57.3岁.1例肺部良性病变患者组织标本为男性,年龄52岁.通过质粒构建及甲基化转移酶和亚硫酸盐修饰制备10个基因的甲基化和非甲基化标准品.通过选择甲基化特异性引物来识别甲基化模板,挑选10对甲基化特异性引物并平均分成2组,经佳聚合酶及佳退火温度的选择,建立多重甲基化特异性PCR体系,并应用于19例肺癌组织的检测,计算10个基因的甲基化率.结果 在成功构建10个基因的甲基化和非甲基化标准品的基础上,建立了它们的多重甲基化特异性PCR检测方法.临床标本检测结果显示10个肺癌相关基因的甲基化率分别为p16LNk4A92％,H-cadherin 89％,E-cadherin和DAPK 76 ％,TIMP-3 63 ％,RARβ 50％,MGMT 39％,RASSF1A 21％,GSTP1 11％,hMLH1 0％.2次实验结果重复性较好.结论 这种分2组多重甲基化特异性PCR的方法能一次性检测10个基因甲基化状态,可以应用于临床标本的检测.
关键词： 甲基化 肺癌 多重甲基化特异性PCR
