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黑尾胡蜂文献资料
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黑尾胡蜂磷脂酶A1的分离纯化和活性研究
目的 对黑尾胡蜂磷脂酶的分离方法和活性进行研究,为黑尾胡蜂的毒性机制研究和药用发掘提供实验数据.方法 通过葡聚糖凝胶G-75分子筛柱和肝素亲和柱对黑尾胡蜂毒液中的磷脂酶活性成分进行分离.利用质谱对目的蛋白进行肽指纹图谱分析,利用蛋白测序仪测定目的蛋白N末端氨基酸序列,从结构上对目的蛋白进行鉴定.利用磷脂酶A1检测试剂盒确认目的蛋白对底物磷脂的特异性水解位点,从活性上对目的蛋白进行鉴定.通过血浆复钙时间的测定检测目的蛋白对凝血系统的影响.结果 通过葡聚糖凝胶G-75分子筛柱和肝素亲和柱两步分离纯化,成功从黑尾胡蜂蜂毒中纯化到了1个磷脂酶活性组分.该组分在SDS-PAGE凝胶中表观相对分子质量约为32 000,因此命名为Vtp32.肽指纹图谱分析及N端氨基酸序列比对结果显示Vtp32与Vespa属胡蜂磷脂酶A1(phospholipase A1,PLA1)具有高度的序列相似性.Vtp32可以特异性水解磷脂的sn-1位,因此Vtp32为黑尾胡蜂PLA1.Vtp32水解磷脂可产生溶血性凝脂,导致红细胞裂解.Vtp32可显著延长人血浆的复钙时间,具有抗凝活性.结论 黑尾胡蜂毒液中含有大量的PLA1,可通过葡聚糖凝胶G-75分子筛柱和肝素亲和柱两步分离方法进行纯化.黑尾胡蜂PLA1具有溶血和抗凝活性.
