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三邻甲苯磷酸酯染毒鸡大脑组织中迟发性神经毒性相关蛋白的筛选
目的 从三邻甲苯磷酸酯(TOCP)染毒鸡大脑组织中筛选迟发性神经毒性(OPIDN)相关差异表达蛋白,为进一步探讨OPIDN机制提供靶标蛋白.方法 成年罗曼鹤母鸡32只随机分成1000mg/kg TOCP组(染毒组)、先给40mg/kg PMSF后24 h再给予1000 mg/kg TOCP组(PMSF干预组)、给予40 mg/kg PMSF组(PMSF组)和给予生理盐水的对照组,每组8只.一次性染毒后第5天处死动物,低温环境下分离大脑,匀浆,高速离心提取总蛋白.通过双向凝胶电泳获得完整的全蛋白质图谱,运用图像分析软件(Image Master 2D)对银离子染色的电泳图谱进行分析,并对所选取的蛋白点进行质谱鉴定.结果 染毒组、PMSF干预组和PMSF组鸡大脑组织总蛋白中,分别检测到1185、1294和1063个蛋白点,对照组检测到1332个蛋白点.与对照组比较,染毒组、PMSF干预组和PMSF组匹配率分别为78.32%、79.56%、80.93%.与对照组比较,染毒组差异表达蛋白点有235个,其中,上调点有158个,下调点有77个.根据PMSF的作用特点,在TOCP组中选择与对照组比较差异明显且与PMSF干预组无明显差异的蛋白匹配点,共获得有102个.其中差异表达4倍以上且与PMSF组二次匹配差异无统计学意义的蛋白点有13个.对这些蛋白点做进一步质谱分析和鉴定,获得7个蛋白:homer-1b、Destrin蛋白、热休克蛋白70、真核翻译起始因子、蛋白酶体α1亚基、乳酸脱氢酶B、代谢性谷氨酰胺合成酶.结论 TOCP染毒鸡大脑组织中有112个差异表达蛋白点,可能与OPIDN诱发有关,其中13个差异表达蛋白点可能与OPIDN诱发有密切的关联性.质谱鉴定出7个可能与OPIDN机制关联的蛋白.
