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大鼠颌下腺细胞与含血管内皮生长因子（VEGF）的丝素-壳聚糖支架体外复合培养的实验研究
目的研究含血管内皮生长因子（VEGF）的丝素-壳聚糖支架(Silk fibroin-chitosan scaffcold)对大鼠颌下腺细胞（Rat submandibular gland cells RSGCs）粘附、增殖、分泌作用的影响。方法应用体外组织块法原代培养3d龄Wistar大鼠的颌下腺细胞，免疫组织化学法鉴定来源、胰酶消化法和差速贴壁法纯化、传代扩增。冻干技术制作含VEGF的丝素-壳聚糖支架作为实验组，不含VEGF的丝素-壳聚糖支架作为对照组。用作实验组的每个支架含VEGF浓度为10ng/ml。将浓度为5.0×106/ml的第二代大鼠颌下腺细胞悬浊液分别接种于含有VEGF的丝素-壳聚糖支架（实验组）和不含VEGF的丝素-壳聚糖支架（对照组）进行培养。测定实验组和对照组的大鼠颌下腺细胞的粘附率，免疫组化法鉴定细胞来源。免疫荧光法观察细胞在支架上的生长情况，MTT法检测接种后实验组和对照组的大鼠颌下腺细胞增殖情况。扫描电镜观察接种大鼠颌下腺细胞在支架上生长的超微结构。测定1d-9d培养复合物上清液中淀粉酶含量，检测实验组和对照组的大鼠颌下腺细胞分泌功能。采用SPSS for windows 13.0统计分析软件对结果进行方差分析，检验水准α=0.05，P＜0.05有统计学意义。结果将纯化扩增的大鼠颌下腺细胞与含VEGF的丝素-壳聚糖支架和不含VEGF的丝素-壳聚糖支架成功的复合培养。细胞粘附率检测：实验组粘附率高于对照组。细胞增殖结果显示（MTT法）：接种后1d，实验组细胞数量略大于对照组（P＞0.05），而3d-9d，两组支架上的细胞数量有显著性差异（P<0.05），实验组优于对照组。细胞上清液中淀粉酶含量检测：从3d-9d实验组优于对照组，淀粉酶含量差异有统计学意义（P<0.05）。扫描电子显微镜观察：丝素-壳聚糖支架呈海绵状结构，植入初期大鼠颌下腺细胞成圆形，散在的粘附于丝素-壳聚糖支架网孔内，随着时间的延长，实验组大鼠颌下腺细胞生长情况明显优于对照组。结论含血管内皮生长因子的丝素-壳聚糖支架对大鼠的颌下腺细胞的粘附、增殖、分泌有促进作用。
