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慢性脑低灌注对海马区缝隙连接超微结构和缝隙连接蛋白的影响
目的 观察慢性脑低灌注导致的认知功能受损的大鼠海马区缝隙连接超微结构的变化以及缝隙连接蛋白亚单位的表达变化.方法 通过永久性双侧颈总动脉结扎模型(2-VO)诱导大鼠慢性脑低灌注状态.实验动物分为对照组、2-VO 3周组、8周组和12周组.Morris水迷宫检测空间学习和记忆能力,透射电镜观察大鼠的海马CAI区缝隙连接,逆转录-多聚酶联反应和Western印迹技术检测海马中缝隙连接蛋白(Cx)Cx36、Cx32和Cx26的表达.结果 在水迷宫训练期的3～5 d,手术组大鼠找到平台的潜伏期均显著长于对照组.空间探索实验中对照组在目标象限游泳时间显著长于手术组.所有手术组动物的缝隙连接超微结构都发生了变化.与对照组相比,Cx36转录和翻译水平在手术后3周、8周和12周组均显著降低,mBNA表达量分别为1.533±0.138、0.466±0.086、0.495±0.104、0.626±0.089,蛋白表达量分别是0.982±0.089、0.351±0.056、0.557±0.072、0.595±0.039(均P<0.01).与对照组相比,Cx32的转录和翻译水平在术后3周、8周和12周组均显著降低,mRNA表达量分别为1.215±0.128、0.237±0.079、0.471±0.083、0.556±0.105,蛋白表达量分别为1.089±0.050、0.401±0.055、0.712±0.074、0.837±0.048(均P<0.05或P<0.01).Cx26的转录水平在手术组无显著性改变,蛋白水平较对照组上调,蛋白表达量分别为0.435±0.047、0.635±0.047、1.396±0.056、0.797±0.051(均P<0.05或P<0.01).结论 这些实验结果提示缝隙连接的变化参与了慢性脑低灌注导致的认知功能损伤.
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喹啉对癫(癎)大鼠海马神经元连接蛋白36表达的影响
目的:探讨喹啉对癫癎大鼠海马神经元连接蛋白36(Cx36)表达的影响.方法:64只SD大鼠随机分为正常对照组、癫癎模型组、地西洋治疗组和喹治疗组,每组16只大鼠.采用氯化锂-匹罗卡品诱导制作癫癎大鼠模型,地西泮治疗组子以1mg/kg地西泮治疗,喹啉治疗组予以60mg/kg喹啉治疗.术后分别采用Racine评分和脑电图检查判断癫癎发作情况.分别用免疫荧光染色法、Western blot法检测各组大鼠术后2h、4h时海马神经元Cx36的表达.结果:与正常对照组比较,癫癎模型组和地西泮治疗组大鼠术后2h、4h时海马神经元Cx36表达水平显著升高(均P<0.01).癫癎模型组和地西泮治疗组大鼠术后2h、4h时海马神经元Cx36表达水平比较差异无统计学意义.与癫癎模型组及地西泮治疗组比较,喹啉治疗组大鼠术后2h、4h时海马神经元Cx36表达水平显著降低(均P<0.01).结论:癫癎大鼠海马神经元Cx36表达水平升高,喹啉能抑制这一变化.
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全长和截短型Cx36基因重组载体的构建及在Hela细胞的表达
目的 V构建全长及截短型Cx36基因重组表达载体,观察其在Hela细胞的表达.方法 RT-PCR获得全长及截短型Cx36编码区基因片段,与pCR2.1TOPO克隆载体连接酶切纯化鉴定,亚克隆到pcDNA3构建真核表达载体,脂质体介导法转染Hela细胞,G418抗性筛选阳性克隆,Western 印迹和免疫荧光方法分析Hela细胞Cx36的表达.结果 构建了全长及截短型重组真核表达载体Cx36-pcDNA3,转染的Hela细胞获得稳定表达Cx36的基因,Western 印迹和免疫荧光显示转染的HeLa细胞表达Cx36蛋白,但转染截短型Cx36的Hela细胞表达量明显少于转染全长Cx36的细胞.结论 全长及截短型Cx36基因可在Hela细胞中稳定表达,截短型Cx36基因表达较少.
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连接蛋白36研究进展
Cx36是连接蛋白家族新成员,主要分布在脑组织、视网膜的神经元,也在非神经组织,如胰岛β细胞、肾上腺嗜铬细胞表达.由Cx36组成的缝隙连接是神经细胞电信号转导必需的,对胰腺胰岛素的分泌和肾上腺儿茶酚胺的释放也起重要作用.它的异常与青少年癫痫、遗传性感觉反应刺激异常有关,对学习记忆过程也有影响.
