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p53 hsp90β基因 定点突变文献资料
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p53反式结合hsp90β基因
目的探讨hsp90β基因中p53结合位点(+31/+60)是否参与p53与hsp90β基因的反式结合,以进一步揭示该位点在p53调节hsp90β基因转录中的作用.方法将含有p53结合位点的hsp90β基因片段插入质粒pBS-SK,然后将它与突变引物和选择引物一起依次退火和延伸,经过两轮细菌转化,酶切筛选出突变阳性质粒后进行序列分析.采用电泳迁移率变更测定(EMSA)检测突变后基因片段与转染p53表达质粒的Jurkat细胞核抽提物的结合.结果序列分析证实p53结合位点第2个半位点核心序列的两个碱基已发生突变,EMSA结果表明,突变后基因片段不能与p53结合.结论hsp90β基因中p53结合位点的核心序列在p53与hsp90β基因的反式结合中起关键作用.
关键词： p53 hsp90β基因 定点突变
