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A53T α－synuclein 抑制 SH－SY5Y 细胞2型囊泡单胺转运体的表达
目的：研究稳定表达 A53T α－synuclein 对神经母细胞瘤 SH－SY5Y 细胞中2型囊泡单胺转运体（VMAT2）蛋白表达的影响。方法构建 A53Tα－synuclein 真核表达载体，用脂质体 lipofectamineTM 2000转染 SH－SY5Y 细胞，经 G418筛选获得稳定转染单克隆细胞株；分别采用 Western blotting 及 DCFH－DA 染色检测细胞系A53T α－synuclein 过表达对 VMAT2蛋白的表达及细胞内活性氧类物质（ROS）水平的影响。结果Western blotting结果显示 VMAT2的表达在稳定表达 A53T α－synuclein 的细胞系中明显降低。 DCFH－DA 染色结果显示稳定表达A53T α－synuclein 细胞系内 DCF signal （507．3±7．1）较对照组（410．7±10．5）明显增多（P ＜0．05）。结论A53Tα－synuclein 能够通过抑制 VMAT2的表达，增加细胞内的 ROS 水平，在帕金森病的发病过程中发挥重要作用。
关键词： 帕金森氏病 A53T α-synuclein VMAT2 -
中脑过表达突变型A53T α-Synuclein增加血脑屏障通透性的研究
目的 小鼠中脑特异性过表达突变型A53T α-Synuclein(α-Syn)后,研究其对中脑血脑屏障通透性的影响.方法 应用过表达人转突变型A53T α-Syn基因的帕金森病小鼠模型(简称Pitx3/A53T小鼠),应用免疫荧光共定位和苏木精-伊红(HE)染色,检测Pitx3/A53T及non-Transgenic(nTg)小鼠中脑黑质致密部(SNC)、腹侧被盖区(VTA)及黑质网状部(SNR)白蛋白(albumin)的泄漏情况,GFAP、血管内皮细胞生长因子受体1(VEGFR1)的表达情况,以及血管变化情况.结果 免疫荧光和HE染色结果显示,过表达人突变型A53T α-Syn会促进小鼠中脑部位(SNC、VTA、SNR) albumin的泄漏(P＜0.01),上调GFAP(P＜0.05)和VEGFR1的表达,增加微血管的数目(P＜0.01).结论 过表达突变型A53T α-Syn可能通过影响星形胶质细胞和血管新生,从而增加血脑屏障通透性.
关键词： A53T α-synuclein 血脑屏障 星型胶质细胞 血管新生 中脑 -
PD模型小鼠中脑特异性表达突变型A53T α-Synuclein基因对外周单核细胞浸润的影响
目的 小鼠中脑特异性表达突变型A53Tα-Synuclein(α-Syn)后,研究其对中脑发生外周单核细胞浸润的影响.方法 本研究使用转突变型A53T α-Syn基因的帕金森病小鼠模型(以下简称Pitx3/A53T小鼠),应用免疫荧光共定位技术检测2、12月龄的Pitx3/A53T及non-Transgenic(nTg)小鼠中脑黑质致密部(SNC)、腹侧背盖区(VTA)及黑质网状部(SNR)的P2Y12、CD11b、CD169和Iba-1的表达情况.结果 免疫荧光结果显示,在2月龄的Pitx3/A53T和nTg小鼠,以及12月龄的nTg小鼠中脑部位(SNC、VTA、SNR),仅检测到中枢神经系统(CNS)小胶质细胞(P2Y12+CD11b+和CD169 Iba-1+).在12月龄的Pitx3/A53T小鼠中脑部位,除了有CNS小胶质细胞外,其SNR部位还特异性存在外周单核细胞(P2Y12-CD11b+和CD169+Iba-1+).此外,在2月龄时,Pitx3/A53T小鼠中脑部位的P2Y12表达水平较nTg小鼠高(P＜0.05,SNC、VTA、SNR);12月龄时,Pitx3/A53T小鼠中脑部位的P2Y12表达水平明显低于nTg小鼠(P＜0.01,SNC、VTA;P＜0.001,SNR);与2月龄的小鼠相比,12月龄小鼠中脑部位的P2Y12表达水平明显降低(P＜0.001,Pitx3/A53T;P＜0.05,nTg).结论 小鼠中脑特异性表达突变型A53T α-Syn后,其在老龄时中脑发生外周单核细胞浸润.而且小鼠中脑部位P2Y12的表达水平变化与年龄和突变型A53T α-Syn关系密切.
