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碱性成纤维细胞生长因子对类雪旺细胞形成及增殖的影响
目的 探讨碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,b-FGF)在人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymalstem cells,hUCMSCs)向类雪旺细胞诱导过程中的作用及其对类雪旺细胞增殖的影响.方法 培养鉴定hUCMSCs,经预诱导后将细胞分组,继续培养7d.A1组为普通培养基组,B1组为普通培养基+b-FGF组,C1组为普通培养基+经典诱导成分组,D1组为C1组基础上剔除b-FGF,通过形态学及S100免疫荧光对类雪旺细胞进行鉴定,并记录各组类雪旺细胞数目及S100阳性率,分析b-FGF在诱导过程中的作用.将诱导的类雪旺细胞经纯化后分组培养2d、4d、6d:A2组为普通培养基组,B2组为普通培养基+b-FGF组,检测b-FGF对类雪旺细胞增殖的影响.结果 在诱导实验中,A1组未见明显类雪旺细胞,S100染色阴性,B1、C1、D1组均可见类雪旺细胞形态,S100染色阳性.类雪旺细胞数目及S100阳性率:A1组＜B1组＜C1组(P＜0.05),D1组＜C1组(P＜0.05).在促增殖实验中,各时间点OD值:B2组＞ A2组(P＜0.05).结论 b-FGF可促进hUCMSCs向类雪旺细胞转化,并可促进诱导后类雪旺细胞的增殖.
关键词： 碱性成纤维细胞生长因子 人脐带间充质干细胞 类雪旺细胞 增殖 -
类雪旺细胞与可吸收明胶海绵体外混合培养的实验研究
目的 探讨可吸收明胶海绵作为类雪旺细胞组织工程载体的可能性,为体内移植治疗周围神经损伤奠定基础.方法 体外培养骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells,BMSCs),并诱导为类雪旺细胞,免疫荧光检测细胞标志物,将诱导后的类雪旺细胞接种于可吸收明胶海绵,通过MTT实验检测接种后细胞的活性,扫描电镜观察细胞的形态变化、黏附、增殖等情况.结果 骨髓间充质干细胞经诱导分化后,细胞呈典型雪旺细胞的形态,免疫荧光检测S-100、GFAP表达阳性,并与明胶海绵混合培养后,可黏附于可吸收明胶海绵表面,并正常增殖.结论 可吸收明胶海绵具有良好的生物相容性,可作为组织工程载体搭载类雪旺细胞.
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复合同种异体类雪旺细胞的异种神经支架修复面神经损伤的早期实验研究
目的 探讨化学联合冻融方式处理的脱细胞异种神经支架复合体外培养的同种异体类雪旺细胞后修复面神经损伤的实验效果.方法 取日本大耳白兔腹股沟脂肪垫,通过单酶消化法体外培养脂肪间充质干细胞(adiopose-deribed stem cell,ADSCs),并通过化学试剂及自体富血小板血浆(platelet rich plasma,PRP)体外定向诱导成类雪旺细胞(schwann cell-like cell lineages,SCs-like);取Wistar大鼠双侧坐骨神经,通过化学联合冻融的方式制备脱细胞异种神经支架.使用DiOC16(3)荧光探针进行类雪旺细胞的标记.建立兔面神经5 mm的缺损模型,以不同移植物确立3组实验分组(n=10):A组(自体神经修复组);B组(复合DiOC16-SCs的异种神经支架修复组);C组(单纯异种神经支架修复组).术后8周通过再生神经的电生理、有髓神经纤维密度及特异性蛋白定量评价神经功能的早期修复效果.结果 术后各组动物分笼饲养,均存活良好.解剖时发现各组动物再生神经连续性及完整性均良好,未形成明显的神经瘤.术后8周各组术侧动作电位潜伏期延长,A、B组明显快于C组,且A组与B、C组比较差异均有统计学意义(P＜0.05).甲苯胺蓝染色计算再生有髓神经纤维密度,A、B组明显高于C组(P＜0.05),A、B组之间比较差异无统计学意义.再生神经内特异性蛋白神经生长因子(nerve growth factor,NGF)及脑源性神经生长因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)染色观察,可见A、B组内NGF及BDNF的蛋白含量均高于C组(P＜0.05),且A组NGF蛋白含量高,B组BDNF蛋白含量高.结论 复合体外定向诱导的类雪旺细胞的脱细胞异种神经支架在修复面神经5 mm的缺损中早期获得的修复效果与自体神经的修复效果相近.
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脐血间充质干细胞诱导分化为类雪旺细胞修复大鼠坐骨神经损伤的实验研究
目的 评价将人脐血间充质干细胞(human umbilical cord blood mesenchymal stem cells,hUCBMSCs)来源的类雪旺细胞(Schwann cells,SCs)作为种子细胞,修复大鼠坐骨神经15 mm缺损的效果,为hUCBMSCs应用于临床治疗周围神经缺损提供实验依据.方法 SPF级3月龄雄性SD大鼠45只,体重200 ～ 250 g.取新生儿脐带血,淋巴细胞分离液复合高分子量羟乙基淀粉分离培养hUCBMSCs并鉴定;取第3代hUCBMSCs,采用改良化学诱导法联合细胞因子方法诱导分化培养类SCs并鉴定.取15只SD大鼠坐骨神经,采用液氮反复冻融振荡洗涤法制备去细胞神经基膜管作为支架材料;将密度1×107个/mL的类SCs细胞悬液多点注射至该支架内复合培养7d构建组织工程神经.取SD大鼠30只制备长约15 mm坐骨神经缺损动物模型,根据缺损神经修复方法不同,实验分为A、B、C3组(n=10),A组采用组织工程神经缝合,B组采用未复合类SCs的去细胞神经基膜管缝合,C组采用自体坐骨神经原位缝合.术后行大体观察、坐骨神经功能指数(sciatic function index,SFI)测定、神经电生理功能检测、腓肠肌湿重测定、Masson染色评价神经修复情况.结果 分离培养的hUCBMSCs高表达MSCs表面标志;诱导培养后类SCs经免疫细胞化学染色检测示神经胶质细胞标志物S100b、胶质纤维酸性蛋白、P75表达呈阳性.术后8周,大体观察示A组组织工程神经管壁无坏死及液化,周围轻度粘连,吻合处连续性较好;B组支架外观与A组相似;C组自体神经周围粘连较A、B组轻,吻合口光滑,无明显膨大,颜色与正常神经相似.各组大鼠术后SFI随时间延长呈逐渐降低趋势,C组SFI恢复优于A、B组,A组优于B组(P＜0.05).术后各组大鼠远端吻合口处均可检测到神经复合动作电位,波幅及传导速度C组均优于A、B组,A组优于B组(P＜0.05).术后各组大鼠实验侧小腿腓肠肌与健侧相比,均发生不同程度萎缩;腓肠肌湿重恢复率C组优于A、B组,A组优于B组(P＜0.05).Masson染色示A组可见大量再生神经纤维,有髓神经纤维排列较为整齐、致密,纤维直径相似;C组有髓神经纤维密度、直径及髓鞘厚度和轴突直径均明显多于A、B组,A组多于B组(P＜0.05).结论 hUCBMSCs来源的类SCs能够促进大鼠15 mm坐骨神经损伤修复可作为组织工程神经种子细胞来源.
