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pQE表达系统文献资料
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pQE-hbFGF表达系统的构建及其蛋白质的表达和纯化
目的构建pQE-hishbFGF表达载体,通过一步纯化得到6×HishbFGF蛋白质.方法用PCR扩增目的基因hbFGF,连接到pQEA0载体上,转化到Top10菌株筛选重组子,经测序后将质粒转化到表达菌M15上,经IPTG诱导表达,超声波破菌后通过镍离子螯合层析一步纯化得6×HishbFGF蛋白质,ELISA鉴定产物,用MTT法检测产物促细胞增殖的生物活性.结果hbFGF基因插入pQE载体中,在M15中6×HishbFGF的表达量达到20%,且为可溶性表达.经一步纯化后得到N端带6个组氨酸的hbFGF蛋白,纯度为96%,6×HishbFGF具有免疫原性及促进NIH3T3细胞增殖的活性.结论6×HishbFGF蛋白质在M15中可溶性地高效表达,并经一步亲和层析得到纯度高活性高的产物,降低了生产成本,为大规模生产hbFGF及hbFGF的应用研究奠定了基础.
关键词： 人碱性成纤维细胞生长因子 pQE表达系统 可溶性表达 镍离子螯合层析
