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两种阳离子脂质体介导基因转染的比较研究
基因治疗作为一种革命性的治疗手段,对免疫缺陷病、肿瘤等多种疾病的疗效已得到验证[1-3].而基因治疗若要大规模进入临床治疗,还需进行很多基础性的研究.
关键词： 基因载体 阳离子脂质体 Lipofectamine 2000 DOTAP 转染 -
293T细胞对介孔二氧化硅纳米材料的摄取研究
目的:研究在脂质体Lipofectamine 2000的介导下,293T细胞对介孔二氧化硅纳米材料(mesoporous silica nanomaterials,MSNs)的摄取变化.方法:制备和表征MSNs;293T细胞分别与100 μg/mL MSNs、MSNs+Lipofectamine 2000共孵育,通过透射电镜(transmission electron microscope,TEM)观察及定量分析293T细胞对材料的摄取.结果:TEM、X线衍射及氮气吸附-脱附分析表明,制备的MSNs结构规则、分散性好,尺寸在100 nm左右;TEM定量结果发现,Lipofectamine 2000显著提高了293T细胞对MSNs的摄取,P＜0.001.结论:Lipofectamine 2000能提高293T细胞对MSNs的摄取,为MSNs在293T细胞内的生物应用创造了条件.
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利于树突棘形态学观察的原代海马神经元转染方法的优化
目的:为有助于观察树突棘的变化,探索出较为理想的原代大鼠海马神经元转染方法.方法:应用Lipofectamine 2000和慢病毒2种转染方法对体外培养8d的SD胎鼠海马神经元进行绿色荧光蛋白(GFP)质粒转染,观察海马神经元转染效率和荧光表达情况,并用台盼蓝染色检测神经元的存活率;采用优选出的转染方法对体外培养8d的海马神经元进行转染,观察转染后培养至10、15、20 d和25 d不同时间海马神经元树突棘的生长发育情况;观察8、12d和16d不同时间转染对海马神经元树突棘形态学观察的影响.结果:对于树突棘形态学观察而言,Lipofectamine 2000转染效果显得更为优越;海马神经元培养至20 d时,树突棘发育较成熟;12 d时转染是进行树突棘形态学观察转染的佳时间.结论:用Lipofectamine 2000转染GFP方法对培养12d的神经元进行转染,培养至20 d时树突棘形态学观察效果良好.
关键词： 海马神经元 转染 Lipofectamine 2000 慢病毒 树突棘 -
人β-NGF重组质粒转染GFP转基因小鼠BMSC的实验研究
目的：观察携带有人β神经生长因子（β-NGF）重组质粒的骨髓基质干细胞（BMSC）的生物学特性。方法培养小鼠BMSC ，采用脂质体LipofectamineTM 2000（Lip2000）转染方法将含有人β-NGF基因的重组质粒转染至含有绿色荧光蛋白（GFP）基因的小鼠BMSC中，利用酶联免疫吸附测定（ELISA）的方法检测其β-NGF蛋白的表达水平。结果采用脂质体Lip2000转染方法能成功地将β-NGF重组质粒转染至BMSC ，转染后细胞出现β-NGF基因的表达，并且其表达的β-NGF蛋白能有效地保护转染过程中对细胞的损害。结论经转染后携带β-NGF基因质粒的小鼠BMSC仍有增殖、分化能力，并且具有了β-NGF蛋白的表达能力。
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脂质体介导RNAi的研究
本文选用阳离子脂质体Lipofectamine 2000为基因载体,使用沉默荧光素酶基因的小干扰RNA (siRNA)进行体外RNA干扰(RNAi),对阳离子脂质体转运siRNA的效率进行研究.首先以阳离子脂质体运载质粒DNA转染细胞,并以延滞实验对阳离子脂质体与siRNA的结合能力进行检测；然后通过基因载体将荧光素酶基因载入细胞,转运不同浓度的siRNA对其进行沉默,应用酶标仪对荧光素酶基因的表达进行分析,并用MTT法对转染后细胞存活率进行检测.结果表明:阳离子脂质体Lipofectamine 2000可以高效转运质粒DNA,并可与siRNA很好地结合.在较低的siRNA浓度下,对荧光素酶基因的沉默率达到较高的水平,转运siRNA转染细胞对细胞活性的影响很小,但细胞存活率随着siRNA浓度的增加而逐渐降低.通过优化实验条件,阳离子脂质体转运较低浓度的siRNA即可高效沉默目的基因.
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四种转染试剂对H9C2细胞转染效率的比较
目的 比较4种不同转染试剂对大鼠心肌细胞H9C2细胞的转染效率,以选择优转染方法.方法 以带有增强绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)基因的质粒作为外源基因,分别用4种不同转染试剂FuGENE HD、DNA-In CRISPR、Lipofectamine 3000和Lipofectamine 2000转染H9C2细胞,通过荧光显微镜观察和荧光酶标仪检测荧光强度来评价转染效率,并通过Cell Counting Kit-8 (CCK-8)试剂盒检测4种转染试剂对细胞活性的影响.结果 Lipofectamine 3000转染效率高(＞50％);而DNA-In CRISPR转染效率低(＜1％).4种转染试剂中Lipofectamine 3000对细胞毒性也低,转染48 h后细胞活性为94.55％.结论 转染试剂Lipofectamine 3000在保证相对较高的转染效率的同时也具有低的细胞毒性,更适合用于H9C2细胞的转染.
