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“三明治”培养大鼠原代肝细胞模型评价P-gp介导的洛哌丁胺胆汁排泄
应用模型药物罗丹明123 (Rh123)和“三明治”培养大鼠原代肝细胞(SCRH),建立并验证基于P-gp的胆汁排泄体外评价模型.SCRH培养5天后形成胆管,加入Rh123(10 μmol·L-1),在含Ca2+和无Ca2+ Hanks缓冲液中孵育,用LC-MS/MS分别测定Rh123的细胞蓄积量,计算胆汁排泄指数(BEI)和体外的内在胆汁清除率(CLbile,int).在孵育体系中预先加入已知的P-gp抑制剂环孢素A(CyA)、tariquidar (TQD)和奎尼丁(QND)预孵育30 min,评价抑制P-gp转运体对底物胆汁排泄的影响.Rh123的BEI值为(17.8±1.3)％,平均CLbile,int值为(10.7±0.9) mL·min-1·kg-1,3个抑制剂对Rh123的胆汁清除均呈现剂量依赖性的抑制作用,表明模型构建成功.在此模型上,研究了P-gp介导的洛哌丁胺(LPAD)胆汁排泄以及P-gp抑制剂的影响.LPAD的BEI值为(12.9±1.2)％,平均CLbile,int为(6.1±0.3) mL·min-1·kg-1.CyA、TQD和QND对LPAD胆汁排泄也呈现浓度依赖的抑制作用,证实了P-gp转运体在LPAD胆管外排中的作用,与P-gp抑制剂合用可显著降低LPAD经胆汁的排泄.本文应用SCRH建立了B-Clear模型,为评价新药候选物基于转运体的胆汁排泄和相互作用提供了一个有用的体外工具.
关键词： “三明治”培养大鼠原代肝细胞 P-糖蛋白 胆汁排泄 罗丹明123 洛哌丁胺 -
小檗碱、巴马汀和药根碱在“三明治”培养大鼠原代肝细胞中的胆汁外排特征
目的 研究小檗碱、巴马汀和药根碱在大鼠原代细胞的胆汁外排特征.方法 建立“三明治”培养大鼠原代肝细胞(sandwich cultured rat hepatocytes,SCRH)模型,分别加入小檗碱、巴马汀、药根碱,在含Ca2+和无Ca2+缓冲液中孵育,采用UPLC-MS/MS分别测定3种生物碱的细胞蓄积量,计算胆汁排泄指数和胆汁清除率,评价小檗碱、巴马汀、药根碱在大鼠原代细胞的胆汁外排特征;并考察P-gp、Mrp2抑制剂对3种活性成分在SCRH细胞模型中的外排转运影响.结果 随着孵育时间的延长,3种生物碱的细胞蓄积量增加,且含Ca2+条件下的细胞蓄积量与无Ca2+条件下相比具有明显差异;P-gp抑制剂环孢素A、维拉帕米均能减少小檗碱、巴马汀、药根碱的胆汁排泄,且呈浓度依赖性,Mrp2抑制剂MK571、丙磺舒对3种生物碱的胆汁排泄无明显影响.结论 小檗碱、巴马汀、药根碱均经过胆汁外排,P-gp介导了3种生物碱的胆汁外排,Mrp2未参与其胆汁排泄.
