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抗肿瘤干细胞药物体外活性评价方法
目的 以乳腺癌MCF-7细胞和盐霉素钠为例,建立体外抗癌干细胞药物活性评价的简单方法.方法 无血清、含有生长因子的DMEM/F12培养基培养MCF-7细胞,观察细胞的生长及体外干细胞球形成能力；流式细胞仪检测CD44+/CD24-细胞含量；将无血清培养的、富集的MCF-7干细胞以不同的数量接种到Nu/Nu裸鼠皮下,观察并检验致瘤能力；CCK-8法检测药物对悬浮乳状球样细胞生长的作用.结果 用无血清、含有生长因子的DMEM/F12培养基培养的MCF-7细胞,增殖缓慢,呈悬浮乳状球样；流式细胞仪检测CD44 +/CD24-细胞含量,10％胎牛血清的RPMI1640培养的MCF-7干细胞为(12.8 ±0.6)％,无血清培养的MCF-7干细胞为(97.1±2.4)％；裸鼠接种无血清培养的、富集的MCF-7干细胞约100个细胞即可见肿瘤生成.盐霉素钠对无血清培养条件下的富含癌干细胞的MCF-7细胞有较高的毒性.结论 所获得的CD44+/CD24-细胞具有乳腺癌干细胞特性,且超低黏附培养板和无血清环境可以促进悬浮球状细胞团的形成,CCK-8法是一种简便的体外评价抗癌干细胞药物的检测方法.
关键词： 癌干细胞 无血清培养 CD44+/CD24- 盐霉素钠 悬浮球样细胞团 -
盐霉素和盐霉素钠对人乳腺癌干细胞和乳腺癌细胞体外细胞毒作用的比较
盐霉素是一种从白色链丝菌培养物中分离提取的聚醚类离子载体型抗生素,它广泛应用于畜禽类动物鸡球虫病的防治,并且还能作为饲料添加剂以促进畜禽的生长.近新发现盐霉素具有特异性抑制肿瘤干细胞的作用.目前盐霉素钠的价格只是盐霉素的十分之一,但两者在抑制肿瘤细胞和肿瘤干细胞方面的异同却未见文献报导.本研究以人乳腺癌细胞MCF-7及其干细胞为模型,通过SRB实验对盐霉素及其钠盐的细胞毒性进行了评价和比较.首先,通过流式细胞仪从MCF-7细胞中分选得到了SP细胞;然后用乳腺癌干细胞表面特异性标志物CD44+/CD24-对SP细胞进行了鉴定;后,分别测定了盐霉素和盐霉素钠对分选得到的肿瘤干细胞和肿瘤细胞的体外生长抑制率.结果表明,与乳腺癌细胞相比较,盐霉素和盐霉素钠对肿瘤干细胞均表现出了更强的抑制作用;在同样的给药浓度下,盐霉素和盐霉素钠对肿瘤细胞和肿瘤干细胞的抑制作用未表现出明显的差异.本研究结果提示,在抑制肿瘤干细胞的相关研究中,可以用盐霉素钠替代盐霉素而不会影响抑制效果.
关键词： 盐霉素 盐霉素钠 肿瘤干细胞 人乳腺癌细胞MCF-7 -
一种通过衍生化改进的盐霉素钠含量测定方法及其在脂质体制剂中的应用
盐霉素钠是一种具有治疗肿瘤干细胞潜能的抗生素化疗药物,在药典中收载的盐霉素钠含量测定方法是微生物法,不适于日常科研中快速检测,文献报道的方法也多因辅料干扰,难以定量.因此,其含量测定方法一直困扰着对盐霉素钠生物学效应和机制的深入研究.本研究旨在建立一种紫外-可见分光光度法,用于测定脂质体中包载的盐霉素钠含量.本文采用两种检测方法:(1)紫外吸收法,将盐霉素钠用乙醇溶解后,在287 nm处检测吸光度;(2)香草醛衍生化法,将盐霉素钠用95％乙醇溶解,与香草醛试液在72℃发生显色反应后,在526 nm处进行吸光度检测.通过两种方法对比,确定佳含量测定方法.结果发现,紫外吸收法在287 nm处测定标准曲线线性良好,但是检测限浓度值较高,无法满足脂质体内包载盐霉素钠的测定,而且脂材在287 nm处具有较大干扰;而香草醛衍生化法可以准确的在较低浓度下测定盐霉素钠的含量,吸光度随着时间变化较小,并且在526 nm波长下脂材对盐霉素钠吸光度影响较小.本文通过香草醛衍生化法建立的盐霉素钠含量测定方法,准确地测定脂质体中包载盐霉素钠的含量,精密度和回收率均良好,为盐霉素钠脂质体制剂的生物学机制研究奠定基础.
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盐霉素钠纳米脂质体的制备及表征
目的：制备并表征盐霉素钠纳米脂质体（SLN）。方法采用薄膜分散法制备盐霉素钠纳米脂质体，通过调节脂质体中胆固醇比例，以盐霉素钠包封率为评价指标，筛选盐霉素钠纳米脂质体的优化处方。结果透射电镜显示盐霉素钠纳米脂质体形态圆整，分散性良好，激光粒度仪显示盐霉素钠纳米脂质体平均粒径为99．0 nm ，Zeta电位为－33．5 mV ，包封率为85．7％，载药量为6．7％。通过脂质体包裹，盐霉素钠在水中的高浓度可提高15倍，并证明其具有一定缓释效果。结论笔者得到了粒径大小在100 nm左右，形态均一，包封率和载药量较高的盐霉素钠纳米脂质体，为进一步测定其杀伤肿瘤活性奠定了坚实的制剂学基础。
