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T裁体文献资料
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丙型肝炎病毒核心蛋白基因克隆载体的构建
目的 构建丙肝病毒(HCV)核心基因克隆栽体PMD18T-HCV/core,为进一步研究将HCV核心蛋白的基因调节功能应用于构建可调控性表达栽体治疗病毒性肝炎做好前期基础.方法 将含HCV全长基因的pHCV质粒于大肠杆菌DH5α内扩增,提取pHCV质柱,从pHCV质粒中PCR扩增出HCV核心基因片段并将其插入PMDl8T克隆载体得到PMD18T-HCV/core克隆载体,将PMD18T-HCV/core克隆载体转化DH5α,筛选阳性克隆,抽提重组质粒并进行PCR及酶切鉴定,再行序列分析.结果 经PCR获得582bp含限制性内切酶位点的阳性产物,T载体克隆后,PCR、酶切鉴定及序列分析证实,克隆片段与GeneBank中该基因的序列同源性为97%.结论 该实验成功构建了含HCV核心蛋白基因序列的T载体克隆,提示该克隆是用作亚克隆和抑制肝炎病毒研究的理想克隆.
