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hTERT和GFAP双启动子条件复制腺病毒介导放射性碘治疗脑胶质瘤的实验研究
目的 利用条件复制腺病毒Ad-Tp-E1 a-Gp-NIS感染脑胶质瘤细胞,探讨其介导靶向性放射性碘治疗脑胶质瘤的可行性.方法 克隆人端粒反转录酶(hTERT)和神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)启动子,荧光素酶分析法检测启动子启动效率.构建并纯化条件复制腺病毒Ad-Tp-E1a-Gp-NIS,进行肿瘤选择性病毒复制实验.U87和U251细胞感染Ad-Tp-E1a-Gp-NIS后,进行Westernblot分析蛋白质表达,125I内流及外流和131I克隆形成实验.结果 荧光素分析实验证明,hTERT和GFAP启动子分别可以引导荧光素蛋白在U251和U87细胞中表达,表达效率为37.31％ ～49.00％(F=5.87,P＜0.05)和59.75％ ～62.10％ (F=11.89,P＜0.01).Ad-Tp-E1 a-Gp-NIS能够在hTERT阳性和GFAP阳性实现肿瘤选择性复制,且在GFAP启动子引导下能成功表达hNIS基因.Western blot分析表明,hTERT蛋白和GFAP蛋白在U87和U251细胞中显示出相对分子质量为120×103和49×103的条带.感染Ad-Tp-E1 a-Gp-NIS后,U87细胞摄碘能力提高78.80倍(F=2 914.58,P＜0.01),U251细胞摄碘能力提高92.48倍(F=2 275.91,P＜0.01).体外细胞克隆分析证明,感染病毒并在131I中孵育12 h后,超过90％的肿瘤细胞被杀死,而对照组细胞仅有65％(t=11.73 ～78.33,P＜0.01).结论 Ad-Tp-E1 a-Gp-NIS能实现条件性复制并具有明确的肿瘤靶向性.在细胞水平实验中,能引导放射性131I杀死胶质瘤细胞.
