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γ射线增强喉癌细胞hTERTp启动子活性研究
目的 探讨γ射线对喉癌细胞中端粒酶逆转录酶基因启动子(hTERTp)活性的影响,以及通过射线增强hTERTp下游基因表达的可行性.方法 将含hTERTp的质粒转染细胞,采用报告基因评价启动子活性,通过RT-PCR和酶活性检测观察射线作用下hTERTp调控辣根过氧化物酶(HRP)的表达,克隆形成实验评价射线对phTERTp-HRP/IAA杀伤和放射增敏作用的影响.结果 在Hep-2细胞中,6 Gy γ射线照射后hTERTp活性是0 Gy照射后的2.96倍,在Hep-2R细胞中是1.60倍.质粒phTERTp-HRP转染Hep-2和Hep-2R细胞后,6 Gy照射组的HRP mRNA分别增高2.1和1.1倍,酶活性分别增高2.54和1.23倍.6 Gy联合吲哚乙酸(IAA)组Hep-2细胞的存活分数为1.3%,Hep-2R细胞的存活分数为3.5%,比对照组明显降低(F=234.280和F=357.148,P值均＜0.01).6 Gy联合IAA组与IAA组相比,放射增敏比SERSF2分别为1.52(Hep-2)和1.68(Hep-2R),存活曲线的参数α分别为0.416、0.099(Hep-2)和0.356、0.090(Hep-2R).结论 γ射线可以增强不同放射敏感性喉癌细胞hTERTp活性,增强下游基因表达.射线联合phTERTp-HRP/IAA对喉癌细胞具有更加明显的杀伤和放射增敏作用.
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喉癌细胞hTERT启动子介导基因治疗研究
目的 研究喉癌细胞中端粒酶活性、端粒酶逆转录酶(hTERT)表达和hTERT启动子活性的关系,以及hTERT启动子介导喉癌基因治疗的可行性.方法 将含hTERT启动子的质粒转染不同放射敏感性喉癌细胞(Hep2和Hep2R),通过报告基因评价启动子活性,RT-PCR检测hTERTmRNA表达,PCR-ELISA法检测端粒酶活性.构建质粒phTERTp-HRP,用RT-PCR和酶活性分析评价辣根过氧化物酶(HRP)表达,以克隆形成实验评价phTERTp-HRP/吲哚乙酸(IAA)对克隆形成率和放射敏感性的影响.结果 Hep2R的端粒酶活性、hTERT mRNA表达水平和hTERT启动子活性分别是Hep2的1.37、1.43和1.81倍.hTERT启动子活性与hTERT mRNA表达水平和端粒酶活性之间显著正相关(P＜0.01).转染phTERTp-HRP后,Hep2R细胞中HRP mRNA表达和HRP活性水平分别是Hep2细胞的2.1倍和1.8倍.0.5 mmol/LIAA处理后,SERSF2分别为1.24(Hep2R)和1.20(Hep2),无IAA和有IAA组存活曲线参数α分别为0.020、0.090(Hep2R)和0.042、0.099(Hep2).结论 hTERT启动子可用于不同放射敏感性喉癌细胞的基因治疗.hTERTp-HRP/IAA基因治疗有望用于喉癌细胞的靶向杀伤和放射增敏.
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HRP/IAA酶前药系统抗鼻咽癌的实验研究
目的 体外、原位实验观察HRP/IAA酶前药系统对鼻咽癌C666-1细胞的杀伤效应,以探讨其对鼻咽癌的治疗作用.方法 细胞转染获得稳定表达HRP蛋白的C666-1细胞.MTT法检测不同浓度的IAA对HRP表达阳性的C666-1细胞的杀伤效应.原位基因治疗:取5×106对数生长期的C666-1细胞接种裸鼠右腋下,建立鼻咽癌裸鼠移植瘤模型,接种细胞10d后将裸鼠随机分成3组,观察HRP/IAA酶前药系统对移植瘤生长的抑制作用.结果 体外实验中,同一浓度IAA干预后C666-1/HRP(+)组细胞的相对存活率显著低于C666-1/HRP(-)组(P＜0.05),且随着IAA浓度的升高C666-1/HRP(+)组细胞的相对存活率逐渐降低,分别为(15.58±1.12)%、(10.11土1.06)%、(5.21±1.04)%;原位基因治疗实验结果表明IAA组鼻咽癌移植瘤生长受到抑制,体积明显小于空病毒组和生理盐水组(P＜0.05),且肿瘤细胞凋亡显著增多(P＜0.05).结论 HRP/IAA酶前药系统对鼻咽癌C666-1细胞具有杀伤作用,具有抗鼻咽癌的作用.
