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自杀质粒同源重组方法构建弗氏志贺菌htrA可控表达菌株
目的：构建弗氏志贺菌HtrA蛋白的可控表达菌株。方法构建自杀质粒同源重组载体，利用重组方法在基因组htrA前插入阿拉伯糖启动子，同时构建并导入外源表达AraC蛋白的表达载体，实现对HtrA蛋白的可控表达；在此基础上，通过蛋白印迹实验，检测诱导前后全菌以及周质中HtrA蛋白的表达情况。结果测序结果表明，自杀质粒同源重组载体以及外源表达载体构建成功；蛋白印迹实验结果显示，对比阿拉伯糖诱导菌株，未诱导菌株中基本未检测到HtrA蛋白的表达。结论自杀质粒同源重组方式可在无阿拉伯糖时有效阻遏HtrA蛋白的表达；同时在诱导后，还可恢复HtrA蛋白的正常表达，有利于后续功能研究。
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利用比较基因组学研究河弧菌和霍乱弧菌在阿拉伯糖代谢试验中不同表型的分子遗传基础
目的 利用比较基因组学研究河弧菌与霍乱弧菌阿拉伯糖发酵实验差异的分子遗传机制. 方法 比较河弧菌EF85003和霍乱弧菌N16961在以L-阿拉伯糖或葡萄糖为单一碳源的M9培养基中的生长曲线.对河弧菌EF85003进行基因注释,预测阿拉伯糖操纵子区域,利用比较基因组学两两比较河弧菌EF85003、弗尼斯菌NCTC11218和霍乱弧菌N16961序列. 结果 河弧菌EF85003可在以L-阿拉伯糖或葡萄糖为单一碳源的M9培养基中生长,而霍乱弧菌N16961仅在以葡萄糖为单一碳源的M9培养基中生长.比较基因组学研究发现河弧菌EF85003序列中VFL_ 003620基因至VFL_ 003628基因为阿拉伯糖操纵子区域,而霍乱弧菌N16961全基因组序列中不含完整的阿拉伯糖操纵子. 结论 河弧菌EF85003基因组上存在阿拉伯糖操纵子区域,霍乱弧菌N16961基因组序列中不含完整的阿拉伯糖操纵子,造成了河弧菌EF85003和霍乱弧菌N16961在阿拉伯糖发酵实验中的不同表型.
