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反式剪接文献资料
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环式增强型绿色荧光蛋白热稳定性及Npu DnaE内含肽高反式剪接效率研究
目的 在体内借助Npu DnaE内含肽(intein)的高效反式剪接作用获得环式增强型绿色荧光蛋白(Cyc-EGFP).方法 对构建的融合表达载体pET/Npu DnaE intein/EGFP-28a( + )进行诱导、表达,之后利用亲和纯化获得高纯度的Cyc-EGFP和增强型绿色荧光蛋白(EGFP),并对二者的荧光强度和热稳定性进行比较.结果 Npu DnaE内含肽环化效率可达98%以上,明显优于Ssp DnaE内含肽,环化后的EGFP热稳定性提高了4～5℃.结论 Cyc-EGFP这一明显优势使蛋白环化在蛋白质工程等领域具有重要的应用价值.
