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NELL-1调控RUNX2的P1启动子诱导成骨分化
目的 探讨骨生长因子Nel样蛋白1(NELL-1)与骨核心转录因子RUNX2之间的调控机制.方法 构建并产生含RUNX2的P1启动子和绿色荧光蛋白报告基因的慢病毒,感染小鼠骨髓间充质细胞系M2-10B4细胞,通过流氏细胞仪检测绿色荧光蛋白细胞记数值,观察不同浓度外源NELL-1蛋白对RUNX2的P1启动子的调控作用.茜素红染色半定量法检测NELL-1促进M2-10B4细胞成骨作用以及实时定量聚合酶链反应(PCR)检测NELL-1蛋白对小鼠M2-10B4细胞成骨相关基因表达的影响.采用单因素方差分析数据.结果 当加入800和1600 ng/ml NELL-1蛋白时,NELL-1蛋白组绿色荧光蛋白细胞记数值分别较对照组增高82.09%、92.36%,且差异均有统计学意义(FN800=26.979,PN800<0.05;FN1600=28.410,PN1600<0.01).茜素红染色定量检测结果表明,800 ng/ml NELL-1组小鼠M2-10B4细胞较对照组产生的矿化结节升高约73.41%,差异具有统计学意义(FN800=31.179,PN800<0.01).实时定量PCR结果显示,NELL-1蛋白促进成骨相关基因骨核心转录因子RUNX2、骨桥蛋白(OPN)、骨钙蛋白(OCN)和碱性磷酸酶(ALP)表达上调.结论 NELL-1蛋白可以通过调控RUNX2的P1启动子促进RUNX2表达诱导骨髓间充质细胞成骨分化.
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Nell-1基因启动子区甲基化在胃癌中的研究
目的:探讨Nell-1基因启动子区不同甲基化位点与胃癌患者术后病理分期及淋巴结转移度之间相关性.方法:收集2012年4月至2012年9月在哈尔滨医科大学附属第四临床医院肿瘤外科25例接受胃癌根治术的病人资料,运用配对t检验及线性回归统计方法,分析Nell-1基因启动子区不同甲基化位点与胃癌患者临床病理资料之间的相关因素.结果:Nell-1基因启动子区不同甲基化位点的胃癌组织组和胃正常组织组甲基化率之间的差别有统计学意义(第1号位点及第38号位点),简单线性回归结果分析显示在第1号位点随着患者术后病理分期逐渐降低,胃癌组织组和胃正常组织组甲基化率之间的差值会逐渐增大(负相关);而在第38号位点随着淋巴结转移度的逐渐增大,胃癌组织组和胃正常组织组甲基化率之间的差值会逐渐增大(正相关).结论:胃癌的发生受诸多因素的影响,不同甲基化位点其甲基化率不同,其与胃癌患者临床病理资料之间存在一定相关性.
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Nell-1基因启动子区甲基化与胃癌围手术期相关因素的研究
目的 探讨Nell-1基因启动子区不同甲基化位点与胃癌围手术期有关联的各种因素之间的相关性,研究胃癌患者术后体重减轻对于胃癌患者5年生存期的影响.方法 收集2012年哈尔滨医科大学附属第四医院肿瘤外科25例接受胃癌根治术的病人资料,运用配对t检验及简单回归分析统计方法,分析Nell-1基因启动子区不同甲基化位点与胃癌患者围手术期各种因素之间的相关性,运用Log-rank检验比较不同体重减轻组胃癌患者5年无病生存期及总生存期.结果 Nell-1基因启动子区不同甲基化位点的胃癌组织组和胃正常组织组甲基化率之问的差别有统计学意义(1、11、22号位点),简单回归分析结果显示第1号位点随着患者术后体重减轻百分比的数值逐渐减小,胃癌组织组和胃正常组织组甲基化率之间的差值会逐渐增大(负相关);第11号位点随着D-二聚体的数值逐渐增大,胃癌组织组和胃正常组织组甲基化率之间的差值会逐渐增大(正相关),第22号位点随着患者血小板计数的数值逐渐减小,胃癌组织组和胃正常组织组甲基化率之间的差值会逐渐增大(负相关).体重减轻＜12％的胃癌患者5年无病生存期明显优于体重减轻＞12％的胃癌患者,体重减轻＜12％的胃癌患者5年总生存期明显优于体重减轻＞12％的胃癌患者.结论 胃癌的发生、发展及预后受诸多因素的影响,不同甲基化位点其甲基化率不同,其与胃癌患者围手术期相关因素之间存在一定关联性,不同体重减轻组胃癌患者无病生存期及总生存期均存在差异.
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Nell-1基因启动子区甲基化与胃癌预后因素的关联研究
目的 探讨Nell-1基因启动子区不同甲基化位点与胃癌预后有关联的各种因素之间的相关性.方法 收集2012年哈尔滨医科大学附属第四医院肿瘤外科25例接受胃癌根治术的患者资料,运用混合效应线性模型分析Nell-1基因启动子区不同甲基化位点与胃癌预后有关的各种因素之间的相关性.结果 Nell-1基因启动子区第26号甲基化位点的胃癌组织组甲基化率与胃正常组织组甲基化率之间的差别有统计学意义,混合效应线性模型分析显示胃癌预后有关的因素(癌胚抗原、糖蛋白抗原199)对Nell-1基因启动子区第26号甲基化位点的甲基化率有影响,相同影响因素下该位点胃癌组织组甲基化率受到的影响程度高于胃正常组织组.结论 不同甲基化位点其甲基化率不同,其与胃癌患者肿瘤标记物之间存在一定相关性.
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Nell-1型分子基因对大鼠骨髓基质细胞成骨分化的影响
目的:研究Nel-like 1型分子(Nell-1)基因对体外培养大鼠骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells,bMSCs)成骨分化的影响.方法:实验分为未转染组、转染β-半乳糖苷酶(β-Galactosidase,LacZ)基因的LacZ组以及转染Nell-1基因的Nell-1组.取6周龄雄性Fischer 344大鼠胫骨和股骨骨髓体外培养,以腺病毒为载体,进行基因转染.以反转录PCR和Western印迹法验证bMSCs中Nell-1基因的表达.以碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性定量测定、骨钙素(osteocalcin,OC)含量测定和Yon Kossa法检测Nell-1基因转染对bMSCs成骨分化的影响.采用SAS 6.04软件包对数据进行随机设计的方差分析(ANOVA-SNK).结果:Nell-1组可检测到Nell-1基因转录水平和蛋白水平的表达,未转染组和LacZ组未见明显Nell-1基因表达.Nell-1组ALP活性在转染后3d、6d和9d均高于LacZ组和未转染组.Nell-1组在转染后14d、28d时,OC含量分别为(1.23±0.05)ng/mL和(1.31±0.06)ng/mL,高于未转染组的(0.81±0.09)ng/mL和(1.00±0.05)ng/mL,以及LacZ组的(0.92±0.08)ng/mL和(1.02±0.04)ng/mL.钙结节数Nell-1组在转染后21d和28d分别为4.5±1.1和16.2±2.5,高于未转染组的0.8±0.7和3.2±1.2以及LacZ组的0.7±0.5和3.7±0.8,其差异均有显著性(P＜0.05).结论:Nell-1基因可促进体外培养bMSCs的成骨分化.
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实时定量PCR检测Nel样型分子基因对大鼠骨髓基质细胞成骨相关基因表达的影响
目的:研究Nel-like 1型分子(Nell-1)基因对体外培养大鼠骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells,bMSCs)成骨相关基因表达的影响.方法:取6周龄雄性Fischer 344大鼠胫骨和股骨骨髓体外培养,以腺病毒为载体,进行基因转染,绘制生长曲线并测定转染效率.以转染β-半乳糖苷酶(β-Galactosidase,LacZ)基因的bMSCs为对照组,转染Nell-1的bMSCs为试验组,用实时定量PCR(real-time PCR)测定成骨相关基因碱性磷酸酶基因(alkaline phosphatase,ALP)、骨涎蛋白(bone sialoprotein,BSP)、骨钙素(osteocalcin,OC)、骨桥蛋白(osteopontin,OP)和Sox9的表达.以2-△△CT法计算基因表达的相对比值.结果:随着Nell-1基因转染滴度的增高,细胞增殖速度减慢.基因转染效率随滴度增加而增高.Nell-1基因转染大鼠bMSCs,早期下调、中期和晚期上调ALP的表达,晚期上调OC的表达,整个成骨周期中均上调OP和BSP的表达.结论:Nell-1基因可能通过影响各成骨相关基因的表达而促进大鼠bMSCs的成骨分化.
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nell-1基因直接体内转染修复犬下颌骨的缺损
目的:探讨含Nell-1基因逆转录病毒液与聚羟基丁酸酯(PLGA)生物材料复合后修复犬下颌骨缺损的效果.方法:制备含Nell-1真核细胞表达载体的逆转录病毒液PT-PLNCX2-Nell-1.制备比格犬下颌骨15 mm×10 mm×5 mm的箱状缺损模型,修复实验分为2组:PT-PLNCX2-Nell-1+PLGA修复组(实验组),PLGA修复组(对照组),每组8个样本,分别于术后8,16 wk进行大体观察、X线检测和组织学检测.结果:PT-PLNCX2-Nell-1重组病毒液与生物材料复合修复组可见在骨缺损处有骨性连接形成,骨缺损修复,组织学观察见有大量新生骨组织形成; PLGA修复组未见骨性连接形成,仅在部分骨缺损两断段形成少量骨组织.结论:利用Nell-1基因体内局部、直接转移的方法能够用于犬下颌骨缺损的修复.
