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粒/巨噬细胞集落刺激因子对培养人牙周膜成纤维细胞生物学特性的影响
目的:了解粒/巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)对体外培养的人牙周膜成纤维细胞(PDLFs)生物学活性的影响.方法:利用体外培养人PDLFs的方法,观察不同浓度的GM-GSF对PDLFs的增殖、碱性磷酸酶活性、蛋白质合成量的影响.结果:GM-CSF在较低浓度时即对PDLFs的增殖、碱性磷酸酶活性、蛋白质合成量有促进作用,它们的变化与浓度变化呈一定的相关性.结论:提示GM-CSF可能通过PDLFs在牙周膜细胞参与牙槽骨改建的过程中起一定的作用.
关键词： 粒/巨噬细胞集落刺激因子 牙周膜成纤维细胞 碱性磷酸酶 -
不同根面处理方法对重度牙周炎患牙根面的影响
目的:比较4种根面处理方法对重度牙周炎患牙根面结构、牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,P.gingivalis)和牙周膜成纤维细胞(human periodontal ligament cells,hPDLCs)根面黏附、增殖的影响.方法:将因重度牙周炎拔除的100颗离体牙龈下刮治和根面平整(scaling and root planning,SRP)后制成根片,随机分为SRP组、派丽奥组、EDTA组和Nd:YAG组,进行相应处理.扫描电镜(scanning electron microscope,SEM)和原子力显微镜(atomic force microscope,AFM)观察根面形态和粗糙度.将P.gingivalis和hPDLCs分别接种于各组根片表面,Cell Counting Kit-8(CCK-8)法测定根面P.gingivalis和hPDLCs的吸光度值.结果:SEM显示SRP组表面玷污层较多,其余3组均去除玷污层;AFM显示派丽奥组根面粗糙度小,Nd:YAG组粗糙;P.gingivalis接种于根面4h和1d时,派丽奥组和Nd:YAG组黏附量少;hPDLCs接种于根面后,派丽奥组和Nd:YAG组增殖明显.结论:刮治结合派丽奥、刮治结合Nd:YAG激光处理利于hPDLCs根面黏附和增殖,明显减少P.gingivalis在根面的早期定植.
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Del-1在人牙周膜成纤维细胞中的表达及相关炎症机制初探
目的:检测Del-1蛋白在人牙周膜成纤维细胞中的表达情况,并观察内毒素(lipopolysaccharides,LPS)对人牙周膜成纤维细胞Del-1表达的影响,探讨其在牙周炎进展中的可能作用机制.方法:组织块法取人牙周膜成纤维细胞,用细胞免疫荧光、流式细胞术及体外管腔形成试验鉴别细胞来源,细胞免疫荧光检测Del-1蛋白在人牙周膜成纤维细胞中的表达情况;用不同浓度LPS刺激细胞,检测Del-1蛋白的表达水平,以Del-1减少显著的LPS浓度为佳刺激浓度,再用该浓度的LPS刺激细胞不同时间,检测Del-1及炎症因子IL-6的表达水平;用不同浓度的Del-1蛋白预刺激细胞1h,再用佳浓度的LPS刺激细胞24 h,检测炎症因子IL-6的表达情况;用适宜浓度的Del-1蛋白预刺激细胞1h,再用LPS刺激细胞10 min,检测IκBα的激活情况.结果:Del-1蛋白在人牙周膜成纤维细胞中有表达,定位于细胞的胞浆中;LPS刺激细胞时Del-1的表达水平降低,并随浓度的升高和处理时间的延长而下降,IL-6的表达与之相反;Del-1蛋白可下调LPS诱导的炎症因子IL-6的表达,抑制IκBα的磷酸化.结论:本研究首次发现Del-1可以在人牙周膜成纤维细胞中表达,且在LPS刺激人牙周膜成纤维细胞时表达量降低,Del-1蛋白可通过抑制NF-κB通路的激活,在牙周炎的发生发展中发挥拮抗作用.
关键词： 牙周膜成纤维细胞 Del-1/Edil 3 炎症 内毒素 -
六种保存液对牙周膜成纤维细胞活性的影响
目的 评价6种不同保存液对牙周膜成纤维细胞活性的影响.方法 培养因正畸拔除的前磨牙分离出的牙周膜成纤维细胞,采用CCK-8法检测细胞在自来水、Hank平衡盐溶液、豆浆、生理盐水、牛奶和DMEM高糖培养基6种保存液中1h、2h、4h、8h和24h五个时间点时的细胞生物学活性.结果 在五个时间点,DMEM组细胞残存率大于生理盐水组,两组差异有统计学意义(P＜0.01),豆浆、HBSS和DMEM三组之间细胞残存率无统计学差异(P＞0.05),在1h、4h和24h 3个时间点,牛奶组细胞残存率大于DMEM组和豆浆组,其两组差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 牛奶、豆浆、HBSS和DMEM高糖培养基4种溶液是有效的牙周膜成纤维细胞临时保存液,而生理盐水和自来水保存效果差,不适合作为保存液.
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基于ROS/TXNIP/Nlrp3探讨芦荟大黄素对P.g-LPS诱导的小鼠牙周膜成纤维细胞的影响
目的 研究芦荟大黄素(aloe-emodin,AE)对牙龈卟啉单胞菌脂多糖(P.g-LPS)诱导的牙周膜成纤维细胞Nlrp3-in-flammasome活化的影响.方法 体外培养牙周膜成纤维细胞,采用P.g-LPS作为刺激剂,通过Western blot观察不同浓度芦荟大黄素(aloe-emodin,AE)对Nlrp3、前体caspase-1(pro-caspase-1)、活化caspase-1(cle-caspase-1)、TXNIP蛋白表达量的影响分子活化程度,利用RT-qPCR方法检测其对前体caspase-1、Nlrp3转录水平的影响,并使用荧光探针法评价对ROS生成量的影响.结果 与空白对照相比,给予P.g-LPS刺激的小鼠牙周膜成纤维细胞Nlrp3、前体caspase-1、TXNIP的蛋白表达量及ROS的生成量明显增高,活化caspase-1的生成明显增多,AE可以明显降低Nlrp3、前体caspase-1,活化caspase-1,TXNIP在细胞内的蛋白表达量,同时抑制Nlrp3和前体caspase-1的转录水平并且减少ROS在细胞内的生成量.结论 AE能通过抑制Nlrp3相关蛋白的表达及减弱ROS/TXNIP诱导的Nlrp3-inflammasome聚集明显抑制P.g-LPS诱导的小鼠牙周膜成纤维细胞Nlrp3-inflam-masome的活化.
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牙龈卟啉单胞菌对牙周膜成纤维细胞活性、炎性因子与骨代谢基因表达的影响研究
目的：探讨牙龈卟啉单胞菌（ P．gingivalis）活菌感染牙周膜成纤维细胞（ PDLF）后对细胞活性、炎性因子和骨代谢相关基因表达的影响。方法 P．gingivalis活菌分别以109、108、107、106、105 CFU／ml浓度感染PDLF 6 h，检测细胞活性和白细胞介素-6（ IL-6）、IL-8、IL-1β、肿瘤坏死因子-α（ TNF-α）、RANKL、骨保护素（ OPG）的基因表达。结果 P．
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烟草对人牙周膜成纤维细胞作用机理的研究进展
吸烟是牙周病尤其是重度牙周病的高危因素.目前已证实吸烟是牙周病发生发展过程中重要的危险因素之一.研究结果表明烟草中含有4000多种毒素、CO、毒性物质如氧化根、致癌物质亚硝基胺和尼古丁等,其中尼古丁是烟草中的主要生物碱,约占烟草生物碱总量的95%以上.近年来,大量的体外研究表明,尼古丁可影响人牙龈和牙周膜成纤维细胞(periodontal ligament fibroblasts,PDLFs)的增殖及贴附[1-3],吸烟人群牙周病的发病率远远高于非吸烟人群,并且在牙周病患者中,吸烟人群的牙周破坏更加明显[4].现将已知烟草对牙周膜成纤维细胞生物学的影响机制加以综述.
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HMGB1对人牙周膜成纤维细胞骨钙蛋白和骨涎蛋白表达的影响
目的 探讨高迁移率族蛋白B1(HMGB1)对人牙周膜成纤维细胞(PDLCs)骨钙蛋白(OC)和骨涎蛋白(BSP)表达影响.方法 原代培养人PDLCs,取传4～6代细胞,随机分为HMGB1组、对照组,HMGB1组给予100 ng/mL HMGB1处理,对照组不予HMGB1处理.采用RT-PCR法和Western blotting法分别检测各组OC、BSP mRNA和蛋白表达.结果 HMGB1组OCmRNA和蛋白相对表达量明显高于对照组,BSPmRNA和蛋白相对表达量明显低于对照组(P均<0.05).结论 HMGB1可能通过影响人PDLCs中OC和BSP表达,从而参与牙周病中牙槽骨破坏,继而促进牙周病发展.
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TGF-β1对人牙周膜成纤维细胞增殖和分化的影响
目的 研究转化生长因子β1(TGF-β1)在体外对人牙周膜成纤维细胞(HPDLFs)增殖和分化的影响.方法原代培养HPDLFs,用MTT法观察细胞增殖情况,考马斯亮蓝法和流式细胞仪技术检测细胞蛋白总含量和细胞周期变化,酶动力学法和RT-PCR检测碱性磷酸酶(ALP)活性和ALP mRNA表达变化.结果 2～10μg/L的TGF-β1可促进HPDLFs增殖,呈剂量、时间依赖性(P<0.05);同样剂量的TGF-β1作用48h,细胞蛋白总含量显著升高,且细胞ALP活性增强(P<0.05);10μg/L的TGF-β1作用48h,G1期细胞降低(P<0.05),S期细胞和细胞增殖指数(PI)显著增高(P<0.05);不同浓度TGFβ1作用48h,细胞ALP mRNA表达上调(P<0.05).结论 TGF-β1体外具有促进HPDLFs增殖和分化的作用,可能与TGF-β1促进细胞DNA、蛋白质合成和ALP mRNA的表达及ALP酶活性增强有关.
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富血小板纤维蛋白对人牙周膜成纤维细胞迁移及成骨分化的影响
目的：观察Choukroun’s富血小板纤维蛋白（ PRF）对自体人牙周膜成纤维细胞（ hPDLCs）迁移、成骨分化的影响，探讨PRF在牙周组织再生治疗中的潜能。方法：原代培养hPDLCs；制备PRF，实验分为P1组（1片PRF浸出液）、P2组（2片PRF浸出液）和对照组，划痕实验观察记录各组第24、48、72 h细胞迁移的距离；Transwell制备迁移模型，按实验分组培养24 h后结晶紫染色观察；成骨矿化诱导液制备不同浓度的PRF浸出液（ P1组、P2组），碱性磷酸酶（ ALP）试剂盒检测3、5、7 d细胞破碎液中ALP活性；成骨矿化诱导液连续培养21 d，茜素红染色后测定矿化结节面积。结果：划痕实验中P1组、P2组细胞迁移距离大于对照组（ F＝316．248、32．846和1169．847， P均＜0．001），P1组、P2组比较差异无统计学意义（P均＞0．05）。 Transwell 迁移实验中P1组、P2组与对照组比较，迁移细胞数增加（F＝742．729，P＜0．001），P1组、P2组比较差异无统计学意义（P＞0．05）。 ALP活性P1组、P2组与对照组比较差异均有统计学意义（ F＝474．202、1383．521、2317．965， P均＜0．001）， P1组、P2组比较差异无统计学意义（P均＞0．05）。 P1组、P2组与对照组矿化结节面积比较差异有统计学意义（F＝332．280，P＜0．001），P1组与P2组比较差异无统计学意义（ P＞0．05）。结论：PRF对hPDLCs具有促进其迁移和成骨分化的作用，提示PRF在牙周组织再生工程中具有很大的临床应用潜能。
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富血小板血浆对牙周膜成纤维细胞在病变牙根表面胶原形成的影响
目的:研究不同浓度的富血小板血浆(platelet-rich plasma,PRP)对牙周膜成纤维细胞(peridontal fibro-blasts,PDLFs)在脱矿的病变牙根表面形成胶原的影响.以进一步探讨富血小板血浆在促牙周组织再生中的作用.方法:采用组织块培养法培养原代人牙周膜成纤维细胞,取5～8代细胞用于实验.富血小板血浆的制备采用二步密度梯度离心法,获取PRP待用,取因重度牙周病拔除的病牙,制取牙根片,收集的根片经高压处理后留存待用.观察富血小板血浆对牙周膜成纤维细胞在脱矿的病变牙根表面胶原的形成,用天狼星红组织特染的方法进一步观察病变根片表面胶原形成的情况.结果:MTT结果和天狼星红特异性染色结果:实验组与对照组均有阳性染色,用Histogram功能来分析统计胶原所占面积的百分数,取其平均值,实验组与对照组差异有显著性(P＜0.05).结论:浓度为20％PRP为促进PDLFs在脱矿处理的病变牙根表面附着的佳浓度,并能促进其在处理的脱矿的病变牙根表面胶原的形成.推测PRP和根面脱矿处理在牙周再生中起重要作用.
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牙周膜成纤维细胞在三维静电纺丝纳米纤维支架上的培养
目的:研究人牙周膜成纤维细胞与静电纺丝聚乳酸/聚己内酯纳米纤维支架体外培养的生物相容性.方法:分离、培养人牙周膜成纤维细胞,接种在静电纺丝纳米纤维支架上,与常规培养条件下的细胞进行比较,观察生长形态、生长曲线、倍增时间及活性.结果:人牙周膜成纤维细胞生长情况与常规培养基本一致,2组间的倍增时间比较无统计学差异(P＞0.05),活细胞百分率与正常培养无明显统计学差异(P＞0.05).结论:人牙周膜成纤维细胞在三维静电纺丝纳米纤维上生长、增殖,该支架材料具有很好的生物相容性,可作为牙周膜组织工程候选支架材料.
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牙周膜成纤维细胞对外周血单个核细胞分化的影响
目的:探讨牙周膜成纤维细胞在破骨细胞形成过程中作用；观察破骨样细胞的生长过程.方法:本实验以含有1α,25(OH)2D3和地塞米松的培养基将牙周膜成纤维细胞、单个核细胞分别进行单独或直接共培养,每3d对TRAP阳性多核破骨细胞的数量及牙本质磨片的吸收陷窝数目和面积分别进行记录、计算.结果:不同时间段间的TRAP阳性单个核细胞与TRAP阳性多核细胞数目相比较,差异具有统计学意义(P＜0.05)；同时,不同组间的吸收陷窝数目和面积比较,差异具有显著性(P＜0.001).牙周膜成纤维细胞明显增加了共培养组TRAP阳性多核细胞数量、吸收陷窝数目和面积.然而牙周膜成纤维细胞组与单个核细胞组之间的吸收陷窝数目与吸收陷窝面积差异无统计学意义.结论:末梢血单个核细胞需在牙周膜成纤维细胞存在的条件下,才能形成多核的破骨样细胞.
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EDC交联离子化胶原支架材料的生物学表征
目的:研究EDC交联对离子化胶原支架材料的理化性能的影响.方法:采用侧链修饰结合碳化二亚胺交联改性技术制备实验使用的离子化胶原材料:天然胶原、甲基化胶原、琥珀酰化胶原,通过扫描电境、差示扫描热计、傅里叶变换红外光谱仪和体外酶降解实验分析对胶原材料交联前后的结构与性能进行研究.结果:侧链修饰改变了胶原的表面电荷性质,碳化二亚胺交联提高了天然胶原、甲基化胶原的孔径、孔隙率(P＜0.05)、变性温度、抗酶降解能力(P＜0.05),改变了其化学结构;而对琥珀酰化胶原的孔径、孔隙率、化学结构无明显影响,且降低了其变性温度和抗酶降解能力(P＜0.05).结论:EDC交联可显著改善离子化胶原支架材料的物理化学性能,为其在牙周组织再生中的初步应用提供了实验基础.
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离子化胶原作为牙周组织工程支架材料的实验性研究
目的:检测具有不同表面电荷性质的离子化胶原材料对体外培养的人牙周膜成纤维细胞粘附、生长增殖的影响.方法:MTT法检测人牙周膜成纤维细胞在不同支架(天然胶原、甲基化胶原、琥珀酰化胶原)上的粘附、生长增殖情况,并用扫描电镜进行观察.结果:MTT法:与天然胶原比较,甲基化胶原更有利于人牙周膜成纤维细胞粘附(P＜0.05),琥珀酰化胶原则减弱了细胞粘附(P＜0.05).结论:相对于不具有表面电荷性质的天然胶原,具有表面正电荷性质的甲基化胶原材料促进了人牙周膜成纤维细胞粘附、生长增殖,为新型牙周组织工程支架材料的研究提示了一种方向.
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富血小板胶细胞基质在羊实验性牙周炎牙周缺损中的应用
目的:探讨羊富血小板胶-牙周膜成纤维细胞基质(PRgel- PDLFs)的合成,观察其促进羊中度牙周炎牙周再生的可能作用.方法:建立羊中度牙周炎模型；采用密度梯度离心法从羊新鲜全血中获取富血小板血浆(platelet- rich plasma,PRP),并按一定比例加入牛凝血酶和氯化钙合成富血小板胶(platelet- rich gel,PRgel),然后将其与成纤维细胞PDLFs培养合成PRgel- PDLFs基质,并将其植入动物模型牙周吸收缺损区,10周后处死动物,进行常规组织学检查及CT影像学分析.结果:组织学检查及CT影像学分析均显示,3组在牙根面均可见新生牙骨质样组织、牙周膜和牙槽骨样组织的形成,与空白组相比,PRgel- PDLFs组和PRgel组新生牙周组织明显增多,有统计学意义(P＜0.01).PRgel-PDLFs组新生牙周组织量比PRgel组多,有统计学意义(P＜0.01).结论:体外合成的PRgel- PDLFs基质可明显促进羊牙周炎吸收组织的再生.
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尼古丁诱导人牙周膜成纤维细胞凋亡的实验研究
目的:了解在体外培养环境中,尼古丁对人牙周膜成纤维细胞凋亡的影响.方法:将尼古丁作用于培养至第6代的人牙周膜成纤维细胞后,通过四唑盐比色法、流式细胞仪研究尼古丁能否诱导人牙周膜成纤维细胞凋亡.结果:四唑盐比色法证实当尼古丁浓度在0.05～4 mg/L之间时,对牙周膜成纤维细胞的抑制呈浓度依赖性,流式细胞仪分析提示,当尼古丁浓度在0.5～4 mg/L之间时,对牙周膜成纤维细胞的凋亡率呈浓度依赖性.结论:尼古丁对人牙周膜成纤维细胞有一定的毒性作用,通过抑制牙周膜成纤维细胞增殖和诱导凋亡加重对周膜的破坏.
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雌激素受体β对牙周膜成纤维细胞RANKL表达的影响
目的:研究雌激素受体β(estrogen receptor β,ERβ)对人牙周膜成纤维细胞(human periodontal ligament,HPLF)核因子-κB受体活化因子配体(receptor activator of NF-κB ligand,RANKL)表达的影响.方法:采用基因干涉方法抑制了HPLF细胞中ERβ基因的表达,用雌激素干预ERβ抑制的和未抑制的HPLF细胞,研究细胞RANKL表达的情况.结果:雌激素明显降低了ERβ抑制的HPLF细胞RANKL的表达,但对ERβ未抑制的HPLF细胞RANKL的表达没有显著影响.结论:雌激素可能通过ERβ抑制牙周膜成纤维细胞RANKL的表达.
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富血小板血浆对牙周膜成纤维细胞损伤模型影响的研究
目的:探讨应用富血小板血浆(PRP)对狗牙周膜成纤维细胞(PDLFs)损伤模型的愈合有无影响.方法:采用组织块法培养狗牙周膜成纤维细胞,取第四代细胞接种于12孔板,待细胞融合后制作直径约8 mm的损伤模型.用含1%PRP和10%PRP的培养液继续培养,于损伤后第1、4、7、9、11天分别检测各组细胞数量及细胞覆盖损伤区的情况.结果:1%PRP和10%PRP均可促进损伤PDLFs的移行和增殖.结论:1%PRP和10%PRP均可促进牙周膜成纤维细胞损伤模型的愈合.
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尼古丁对牙周炎相关细胞影响的研究
牙周炎是以菌斑微生物为始动因子,宿主和其它因素共同作用导致的牙周支持组织广泛破坏的疾病.牙周膜成纤维细胞、牙龈成纤维细胞、成/破骨细胞对维持牙周组织的健康至关重要,而上述细胞功能的异常都可能导致牙周炎的发生.此外,中性粒细胞等免疫细胞也在牙周炎的发生发展中也扮演着重要的角色.
