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γ-干扰素基因治疗大鼠胶质瘤的实验研究
目的研究逆转录病毒载体包装细胞介导的细胞因子γ-干扰素(IFN-γ)基因治疗大鼠胶质瘤.方法应用逆转录病毒载体将鼠IFN-γ基因转入逆转录病毒包装细胞PA317,通过G418抗性筛选,得到高滴度产毒PA317IFN-γ细胞株.将PA317IFN-γ细胞注射到脑内荷瘤大鼠的肿瘤组织内,观察其治疗作用.结果成功获得高滴度产毒PA317IFN-γ细胞,PA317IFN-γ细胞瘤内注射能够诱导大鼠产生抗肿瘤免疫反应,抑制肿瘤细胞生长.结论携带IFN-γ基因的逆转录病毒包装细胞瘤内注射是一种有效的胶质瘤基因治疗方法.
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TH基因修饰的中脑星形胶质细胞的建立
目的体外构建酪氨酸羟化酶(TH)基因修饰的中脑星形胶质细胞,为进行帕金森病(PD)的转基因细胞治疗奠定基础.方法应用逆转录病毒表达载体将鼠TH基因转入逆转录病毒包装细胞PA317,通过G418抗性筛选,获取高滴度产毒PA317/pN2ATH细胞株,以其产生的病毒上清感染鼠中脑星形胶质细胞,继续培养7～9 d后,免疫组化检测细胞TH表达.结果获得了高滴度产毒PA317/pN2ATH细胞,并且转染pN2ATH的中脑星形胶质细胞成功表达TH.结论转染pN2ATH的中脑星形胶质细胞可以有效表达TH,为将其应用于PD基因治疗实验研究提供了基础.
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TH基因逆转录病毒表达载体的构建及产病毒细胞系的建立
目的构建含有鼠酪氨酸羟化酶(TH)基因的重组逆转录病毒表达载体pN2ATH,建立PA317产病毒细胞系.方法将质粒pGEM-2上酶切下的THcDNA片段与线性化的逆转录病毒表达载体N2A连接,克隆出重组逆转录病毒表达载体pN2ATH.把pN2ATH质粒转入PA317包装细胞,通过G418抗性筛选,NIH3T3细胞测定病毒滴度,得到高滴度产毒PA317/pN2ATH细胞株,免疫组化测定细胞TH表达.结果重组质粒pN2ATH经酶切鉴定证明THcDNA正向插入N2A表达载体中,PA317/pN2ATH产毒细胞高效表达TH.结论成功地构建了重组逆转录病毒表达载体pN2ATH,建立了PA317/pN 2A产毒细胞株.
