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促自噬剂AZD8055对U87起始细胞Notch通路相关蛋白的表达和成球能力的影响
目的 研究促自噬剂AZD8055对U87细胞株起始细胞Notch通路相关蛋白的表达和成球能力的影响.方法 应用免疫磁珠法分选获得U87细胞株CD133阳性的胶质瘤起始细胞(GICs).采用免疫荧光染色技术鉴定GICs细胞球干性标志物CD133和Nestin,以及自噬相关蛋白LC3B和p62的表达.以CCK8检测AZD8055对U87起始细胞存活率的影响.采用Western blot检测AZD8055不同浓度处理组Notch 1、Notch胞内域、Hes1、p62、LC3B蛋白的表达.通过单细胞成球实验观察AZD8055对GICs成球能力的影响.结果 免疫荧光染色结果显示,GICs细胞球中CD133和Nestin呈阳性表达.CCK8检测结果提示,随着AZD8055浓度的增高,U87起始细胞的存活率逐渐降低.Westem blot结果提示,与溶媒对照组相比,随着AZD8055浓度的升高,药物处理组的自噬水平增高,而Notch1通路相关蛋白的表达降低,且各浓度组之间的蛋白表达差异均有统计学意义(均P＜0.05).免疫荧光染色结果提示,经AZD8055处理后U87起始细胞的LC3B表达明显升高,p62表达降低.单细胞成球实验显示,随着AZD8055药物浓度的增高,各组成球数目和细胞球体积递减,且差异有统计学意义(均P ＜0.05),说明U87 GICs的成球能力降低.结论 AZD8055通过诱发自噬抑制了Notch通路相关蛋白的表达,并且AZD8055能够抑制U87 GICs的成球能力.
