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K562/A02人白血病细胞株文献资料
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MDR1基因短发卡样RNA表达载体逆转K562/A02人白血病细胞多药耐药的研究
目的 构建MDR1基因短发卡样RNA(shRNA)真核表达载体,观察对K562/A02人白血病细胞株MDR1基因的沉默作用以及对P-糖蛋白(P-gp)表达及功能的影响.方法 以基因重组技术构建表达质粒,转染重组质粒pEGFP-C1/U6/MDR1-A和pEGFP-C1/U6/MDR1-B至K562/A02细胞株,通过半定量RT-PCR和蛋白质印迹法,检测MDR1基因表达及P-gp表达水平的变化;以MTT法检测阿霉素(ADM)对K562/A02细胞的半数抑制浓度(IC50);高效液相色谱(HPLC)法检测细胞内ADM含量.结果 构建的2种重组质粒pEGFP-C1/U6/MDR1-A和pEGFP-C1/U6/MDR1-B均明显抑制K562/A02细胞株MDR1基因表达,抑制率高为48.2%±2.5%;同时抑制P-gp蛋白的表达,抑制率高为50.67%.对ADM药物敏感性的相对逆转效率分别为40.8%和62.4%;同时使K562/A02细胞内ADM含量增加.结论 shRNA表达载体可明显抑制K562/A02细胞MDR1 mRNA的转录和P-gp蛋白的表达,增加K562/A02细胞内ADM含量,恢复K562/A02细胞对化疗药物的敏感性,逆转MDR1基因编码蛋白P-gp介导的多药耐药.
关键词： MDR1基因 真核表达载体 K562/A02人白血病细胞株 P-糖蛋白 多药耐药
