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Bcl-2相关抗凋亡蛋白文献资料
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BAG3(WT)与BAG3(△PXXP)真核表达载体的构建与鉴定
目的:构建重组人BAG3 (WT)与BAG3 (△PXXP)的真核表达载体,建立稳定表达EGFP-BAG3 (WT)、EGFP-BAG3(△PXXP)的人甲状腺癌FRO细胞系.方法:基因克隆方法构建pcDNA3-N-EGFP-BAG3 (WT)和pcDNA3-N-EGFP-BAG3(△PXXP)的真核表达载体,应用脂质体介导的转染技术将重组质粒导入FRO细胞,用G418筛选稳定表达的细胞系.FRO细胞中EGFP-BAG3 (WT)、EGFP-BAG3 (△PXXP)的表达用倒置荧光显微镜方法检测.结果:分别成功构建pcDNA3-N-EGFP-BAG3 (WT)和pcDNA3-N-EGFP-BAG3 (△PXXP)重组质粒,获得转染并经G418反复筛选的稳定表达EGFP-BAG3(WT)、EGFP-BAG3 (△PXXP)的FRO细胞系.FRO细胞均能表达绿色荧光,EGFP-BAG3 (WT)主要分布在细胞质内,而EGFP-BAG3 (△PXXP)在细胞质和细胞核内均有分布.结论:成功构建了BAG3 (WT)与BAG3(△PXXP)真核表达载体.
关键词： Bcl-2相关抗凋亡蛋白 基因转染 稳定表达细胞 自噬作用
