首页 > 文献资料
-
EFEMP1促进宫颈癌微血管生成分子机制研究
目的 前期研究已证实EFEMP1能促进宫颈癌微血管增生,本研究旨在进一步探讨EFEMP1促进宫颈癌微血管生成的分子机制.方法 利用Pierce CO-IP试剂盒检测宫颈癌细胞中EFEMP1蛋白和表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)的相互作用,蛋白质印迹法检测蛋白表达.利用MTT实验检测内皮细胞增殖活力,Transwell小室法检测内皮细胞迁移能力,Matrigel胶管腔形成能力实验检测内皮管腔形成能力.构建慢病毒干扰颗粒干扰宫颈癌细胞Jagged1表达.利用免疫组化MaxVisonTM法检测组织蛋白表达,内皮CD34组化标记结合Weinner计数法检测组织中微血管密度(microvsacular density,MVD).皮下接种Hela-EFEMP1+细胞构建高表达EFEMP1的裸鼠荷瘤模型.结果 p-EGFR和p-MAPK在EFEMP1处理组Hela细胞的表达水平(2.35±0.41和2.56±0.44)分别高于对照组(0.20±0.001,P=0.001;0.64±0.020,P=0.001)和PD153035与EFEMP1联合处理组(1.25±0.33,P=0.004;1.46±0.24,P=0.001).CO-IP结果显示,Hela细胞中EFEMP1与EGFR相互作用.处理组内皮细胞24 h活力(1.78±0.048)、迁移能力(71.7±4.91)和管腔形成能力(19.7±1.75)分别高于对照组(1.38±0.046,P=0.001;30±3.46,P=0.002 3;8.7±1.84,P=0.001 8)和联合处理组(1.51±0.072,P=0.004;37.6±4.98,P=0.008 3;12.6±1.48,P=0.009 3).处理组癌细胞中p-MAPK、血管内皮生长因子(vascular endothelia growth factor,VEGF)和Jagged1的表达水平(0.96±0.05,1.25±0.031,0.82±0.036)分别高于对照组(0.16±0.006,P=0.028;0.54±0.047,P=0.013;0.42±0.017,P=0.026)和U0126与EFEMP1联合处理组(0.56±0.022,P=0.042;0.29±0.016,P=0.008;0.38±0.037,P=0.024).EFEMP1处理Hela-Jagged1 siRNA细胞后上清液作用下的内皮管腔形成能力(14±1.58,P=0.006)和γ-SI与处理组正常癌细胞上清液联合作用的内皮细胞管腔形成能力(12.6±1.33,P=0.008),分别低于处理组癌细胞上清液作用下的内皮细胞(19.7±0.89).宫颈癌组织中,EFEMP1表达分别与p-MAPK和Jagged1表达正相关,p-MAPK表达与Jagged1表达正相关,且p-MAPK和Jagged1的表达分别与宫颈癌MVD呈正相关.动物实验结果显示,LV-JAG1-RNAi慢病毒处理组肿瘤平均体积和质量[(0.160±0.007) cm3;(0.43±0.043)曲分别明显小于对照组[(0.25±0.015) cm3,P=0.001;(0.65±0.027)g,P=0.002].此外,处理组平均MVD(5.0±1.23)也低于对照组(8.7±1.15,P=0.014).结论 EFEMP1促进宫颈癌微血管生成的分子机制是通过与EGFR相互作用,激活MAPK-VEGF/Jagged1信号通路,上调宫颈癌VEGF和Jagged1的表达而旁分泌促进内皮血管生成.
-
EFEMP1促进骨肉瘤侵袭及转移能力的研究
目的 检测EFEMP1在骨肉瘤组织及细胞株F4和F5M2中的表达,探讨EFEMP1在骨肉瘤细胞中的表达,明确其对骨肉瘤细胞侵袭和迁移的影响.方法 采用免疫组织化学SP法检测45例临床骨肉瘤及12例骨软骨瘤病例肿瘤组织中EFEMP1表达;采用免疫印迹法(Western blot)及逆转录定量PCR(qRT-PCR)检测具有不同转移潜能的骨肉瘤细胞株(F4、F5M2)中EFEMP1的表达水平;Tanswell实验检测重组人EFEMP1对F5M2细胞侵袭和迁移的影响.结果 免疫组化结果显示在45例骨肉瘤标本中,有42例EFEMP1阳性(93.3％),其中强阳性为29例(64.4％),3例(6.7％)为阴性.骨软骨瘤中EFEMP1表达均为阴性.qRT-PCR检测以及Western-blot结果显示,在mRNA和蛋白水平上,骨肉瘤细胞株F4和F5M2中均有EFEMP1的表达,F5M2细胞株EFEMP1的表达高于F4细胞株,Western-blot显示EFEMP1在F4和F5中均有表达,且在F5M2中EFEMP1表达水平高于F4(P＜0.05),这一结果与qRT-PCR检测结果一致.Tanswell实验结果显示,与阳性对照组和空白对照组相比,实验组F5M2细胞的侵袭和迁移能力显著增加,重组人全长蛋白EFEMP1可促进骨肉瘤细胞的侵袭和迁移能力.结论 EFEMP1在人骨肉瘤组织中表达水平增高,骨肉瘤细胞株F4及F5M2中EFEMP1表达阳性,且高转移骨肉瘤细胞株F5M2中EFEMP1表达量较低转移细胞株F4表达水平明显增高,重组人EFEMP1能够促进骨肉瘤细胞侵袭及转移.EFEMP1可为骨肉瘤患者早期诊断和治疗提供一个新的策略.
-
RNA干扰EFEMP1对卵巢癌细胞增殖、侵袭与转移的影响
目的：探讨fibulin糖蛋白家族中fibulin-3( EFEMP1)对卵巢癌细胞增殖、侵袭与转移的影响，为卵巢癌针对性治疗提供理论基础。方法：利用慢病毒转染RNA干扰的方式，转染具有高侵袭转移能力的S1克隆细胞株，抑制EFEMP1表达。 Western blot、Real-time RT-PCR和免疫组化对转染效果进行验证。采用体外细胞功能分析技术检测干扰前后EFEMP1对细胞增殖、侵袭与转移能力的影响。建立裸鼠皮下移植瘤模型，体内观察EFEMP1对肿瘤生长的影响。结果：RNA干扰有效抑制EFEMP1表达， EFEMP1降表达显著抑制肿瘤细胞增殖、侵袭和转移能力，裸鼠体内成瘤率降低并且肿瘤体积显著下降，同时肿瘤组织Fibulin基因表达显著降低。结论：EFEMP1与卵巢癌发生发展及侵袭转移密切相关，为卵巢癌的治疗提供新的思路。
