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鳞状细胞癌抗原1mRNA实时荧光定量RT-PCR检测方法建立与应用
目的 寻找特异性标志物,建立高效的检测方法对肺癌早期诊断尤为重要.本研究建立人鳞状细胞癌抗原1(squamous cell carcinoma antigen 1,SCCA 1)mRNA实时荧光定量RT-PCR检测方法,并评价其在肺鳞癌循环肿瘤细胞检测中的应用价值.方法 收集安徽省立医院2014-02-01-10-31资料完整的肺鳞癌患者外周血标本28例(其中11例临床已确诊发生远处转移,17例临床未确诊转移),同时选取肺炎患者及正常人外周血标本各10例.运用荧光定量RT-PCR法检测上述样品中SCCA 1 mRNA表达水平.采用回归分析方法制作定量标准曲线,阳性检出率比较采用多个独立样本的Kruskal-Wallis H检验.结果 建立了外周血SCCA 1 mRNA实时荧光定量RT-PCR检测方法,确定了引物、探针、标准品及对照品,检测方法的特异性强,灵敏度高.11例临床确诊已转移的肺鳞癌患者外周血SCCA 1 mR-NA均为阳性,17例临床未确诊转移的患者9例为阳性,8例为阴性,阳性率为71.4％,肺炎患者及正常人检测结果均为阴性,差异有统计学意义,x2 =36.456,P＜0.05.结论 建立的SCCA1 mRNA实时荧光定量RT-PCR检测方法具有很高的临床应用价值,可用于检测肺鳞癌循环肿瘤细胞中SCCA1 mRNA表达水平,可用于肺鳞癌患者的早期诊断.
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基因甲基化抑制鼻咽癌组织SCCA1的表达
背景与目的:鳞状细胞癌抗原1(squamous cell carcinoma antigen 1,SCCA1)与鳞状细胞癌的生长、分化及转移密切相关,鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)组织SCCA1表达水平低于鼻咽黏膜上皮组织,其表达降低的机制不清楚.本研究初步探讨NPC组织SCCA1表达水平降低是否由基因甲基化所致.方法:收集75例NPC活检组织(NPC组)和25例慢性鼻咽炎鼻咽黏膜活检组织(对照组),采用甲基化特异性聚合酶链式反应检测SCCA1基因甲基化状态,PCR检测SCCA1 mRNA表达水平,免疫组织化学染色和Western blot检测SCCA1蛋白表达情况.结果:NPC组SCCA1基因完全甲基化、不完全甲基化和未甲基化的例数分别为38例、27例和10例,对照组不完全甲基化和未甲基化的例数分别为5例和20例,NPC组甲基化频率显著高于对照组(65/75vs 5/25,x2=39.7,P＜0.01).SCCA1基因不完全甲基化导致mRNA和蛋白表达降低,SCCA1基因完全甲基化导致mRNA和蛋白表达缺失.在NPC组,SCCA1不完全甲基化标本mRNA表达水平和蛋白表达水平显著低于SCCA1未甲基化病例(0.22±0.05 vs 0.37±0.07和0.14±0.05 vs 0.31±0.04,P＜0.01)；等级相关分析显示SCCA1基因甲基化程度与NPC组织免疫组织化学染色积分呈负相关(P＜0.01),与NPC淋巴结转移分期呈正相关(P＜0.01).结论:NPC组织SCCA1蛋白质表达降低主要是由基因甲基化所致,SCCA1表达降低可能对NPC淋巴结转移具有促进作用.
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皮肤型红斑狼疮皮损中鳞状细胞癌抗原1的表达和意义
目的:研究鳞状细胞癌抗原1 (squamous cell carcinoma antigen-1,SSCA1)在皮肤型红斑狼疮(cutaneous lupus erythematosus,GLE)皮损中的表达和意义.方法:培养原代角质形成细胞,提取蛋白样品采用固相pH梯度双向凝胶电泳进行分离,应用ImageMaster 2D Platinum 5.0软件对图像进行匹配分析,选取差异表达个蛋白质点,经基质辅助激光解吸附飞行时间质谱进行质谱鉴定.并通过免疫印迹验证其表达水平.结果:体外培养角质形成细胞成功,获得重复性较好的双向电泳图谱,和正常皮肤相比,SCCA1在CLE皮损角质形成细胞中表达升高,免疫印迹验证与双向电泳结果一致.结论:SCCA1在CLE皮损角质形成细胞中表达升高,可能与CLE的发生发展有关,但SCCA1表达升高的具体机制仍需进一步研究.
