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miR-194-3 p对瘢痕疙瘩成纤维细胞迁移的作用
目的 研究miR-194-3p对瘢痕疙瘩成纤维细胞迁移的影响.方法 通过基因芯片方法,筛查出8份人瘢痕疙瘩与正常组织中差异性表达的miRNA.选取下调表达明显的miR-194-3p进行研究,通过miRDB预测其与RUNX2结合作用,并在人瘢痕疙瘩成纤维细胞(human keloid fibroblasts,HKFs)及第3代瘢痕疙瘩细胞中,分别通过荧光报告基因验证miR-194-3p与RUNX2间的作用.在2种细胞中分别通过Transwell实验检测miR-194-3p对成纤维细胞迁移的作用.Western blot及real-time PCR分析HKFs细胞中miR-194-3p对RUNX2及迁移相关蛋白金属基质蛋白酶2(matrix metallopeptidase 2,MMP2)的作用.采用SPSS 19.0软件对结果 进行统计学分析,使用非配对t检验对各组进行比较,P<0.05为差异具有统计学意义.结果miR-721、miR-21-3p、miR-382-3p、miR-194-3p、miR-3107-5p和miR-144-5p在瘢痕疙瘩中存在异常表达的现象;miRDB软件分析显示,miR-194-3p与RUNX2存在靶向结合位点;报告基因实验证明,与对照组相比miR-194-3p能够抑制约50％的RUNX2活性(t=2.7764,P=0.0005).基因和蛋白水平实验发现,miR-194-3p能够显著抑制RUNX2及MMP2的表达,进而抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞的迁移(t=2.7764,P<0.05).结论 瘢痕疙瘩中miR-194-3p可能通过抑制RUNX2的活性来抑制成纤维细胞的迁移.
关键词： 瘢痕疙瘩 成纤维细胞 迁移 miR-194-3p Runx2 -
MiR-194-3p对成纤维细胞的增殖作用研究
目的 研究瘢痕疙瘩中miR-194-3p对成纤维细胞增殖作用的影响,为瘢痕疙瘩的治疗提供理论基础.方法 对瘢痕疙瘩标本应用基因芯片筛选出与正常组织差异表达的miRNA,并通过real-time PCR技术来验证miR-194-3p表达;采用Western-blot和real-time PCR分析miR-194-3p对其靶蛋白RUNX2的调节作用.在成纤维细胞中过表达或抑制miR-194-3p后,通过MTT实验观察其对成纤维细胞增殖的作用.通过Western-blot和real-time PCR探讨其对RUNX2及其增殖相关蛋白CDK4的调控作用.结果 miR-194-3p在瘢痕疙瘩中呈下调表达,其能够抑制RUNX2的表达;miR-194-3p可以通过抑制增殖相关蛋白CDK4来抑制成纤维细胞的增殖.结论 miR-194-3p可以抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖.
关键词： 瘢痕疙瘩 miR-194-3p 成纤维细胞 增殖
